Принцип флотационного метода заключается в способности менее плотных, чем флотационный раствор, частичек всплывать наверх к поверхностной пленке после смешивания флотационного раствора и пробы фекалий. Этот процесс может происходить медленнее, если смесь пассивно отстаивается в течение требуемого времени, либо флотация ускоряется путем центрифугирования смеси.
Выбор флотационных растворов для гельминтологической диагностики
Все методы флотации основаны на всплытии яиц гельминтов, ооцист/цист простейших и личинок в флотационных растворах. Чем выше удельный вес (УВ) флотационного раствора, тем большее количество объектов будет всплывать. Однако, диапазон применяемых флотационных растворов ограничивается – по мере увеличения удельного веса раствора будет всплывать больше сопутствующего мусора, ухудшающего качество исследования и повышающего время, затраченное на исследование, а также возрастает риск повреждения паразитарных объектов гиперосмотическим раствором. Это ограничивает диапазон удельного веса применяемых растворов от 1,18 до 1,35.
В настоящее время отработано множество как простых однокомпонентных флотационных растворов, так и двух- и многокомпонентных. К флотационным растворам, широко используемым в паразитологии, относятся раствор сахара и различные солевые растворы. Ни один раствор не подходит для диагностики всех паразитов сразу.
Широко применяются солевые растворы. Насыщенные растворы хлорида натрия (УВ 1.20) и сульфата магния (УВ 1.32), раствор нитрата натрия ненасыщенный (УВ 1.2) и насыщенный (УВ 1.33-1.35) недороги, их легко купить и приготовить, они эффективны для обнаружения яиц гельминтов и цист простейших.
Флотационные растворы нитрата натрия, насыщенного хлорида натрия, насыщенного сульфата магния и 33% сульфата цинка не будут надежно поднимать большую часть яиц трематод, некоторых ленточных червей и нематод. Для их диагностики стоит применять растворы с более высоким удельным весом или применять для исследования методы седиментации.
Считается, что цисты лямблий быстро разрушаются в большинстве флотационных растворов. Если требуется их обнаружение, лучшим выбором для флотации является 33% раствор сульфата цинка (УВ 1.18), который не вызывает быстрого разрушения цист лямблий. При применении солевых растворов, микроскопирование препаратов следует проводить сразу после их приготовления, поскольку по мере высыхания соль кристаллизуется, что затрудняет дальнейшее исследование.
Приготовление флотационных растворов для гельминтологической диагностики
Соль насыпают в эмалированную емкость с теплой водой при постоянном помешивании и постоянном нагревании до полного растворения соли, при необходимости доводят до кипения. Оставляют остывать до комнатной температуры. Процеживают через фильтр, или слой ваты, или марлю, сложенную в 4 раза, помещенных в воронку. Полученный флотационный раствор переливают в бутыли с плотно закрывающейся крышкой. Образующийся на дне сосуда осадок соли является признаком насыщенности раствора и не является индикатором плохого качества раствора.
После приготовления флотационного раствора сахара и его остывания до комнатной температуры, добавляют формальдегид для предотвращения бактериального роста и потери УВ при хранении. Обязательным является контроль плотности флотационного раствора после приготовления. Еженедельно, перед началом работы, контролируют плотность раствора. Измерение проводят ареометрами для солевых растворов.