1️⃣Нуклеазы цинковых пальцев. (ZFN) — 1996 год
Данная несложная система состоит из двух частей — собственно цинковый палец и рестриктаза (ножницы)
1. Цинковый палец ☝🏼— комплекс Zn-зависимых белков, распознающий последовательность нуклеотидов.
🗺Каждый «палец» крепится к последовательности из трёх нуклеотидов и «распознаёт место, где резать», своеобразный проводник для ножниц (его долго и упорно делают в лаборатории, естественно)
Пальцев чаще всего от 3 до 6 — ищем последовательность от 9 до 18 нуклеотидов, то есть от 3 до 6 триплетов подряд)
2. Рестриктаза ✂️— нуклеаза, разрезающая ОДНУ ИЗ ДВУХ ЦЕПЕЙ ДНК.
Именно поэтому такая штука всегда идёт парой — на одну цепь в одну сторону и на другую в противоположную (фото)
2️⃣ Комплекс TALEN
[Transcription Activator-Like Effector Nucleases; эффекторные нуклеазы, подобные активаторам транскрипции] — 2012 год
Механизм похож, также 2 компонента — ДНК-связывающий и разрезающий (TALE + N (такая же нуклеаза))
⚙️Только теперь мы кодируем не по триплетам, а просто независимо по каждому нуклеотиду — буквально один белковый модуль на один нуклеотид — так легче и гораздо быстрее.
🧩Белки TALE - натуральные.
🌱Их позаимствовали у бактерий-паразитов растений, которые с их помощью активировали транскрипцию нужных им белков для выживания и размножения.
Гораздо более профитный вариант, потому что
☑️Его можно запилить на любые последовательности любой длины
☑️Это потребует гораздо меньше времени, сил и денег, чем ZFN
☑️Специфичность выше, значит меньше косяков будет
‼️НО требует, чтобы с 5’-конца всегда стоял именно тимидин, иногда это может стать проблемой.
А пост про CRISPR Cas выйдет завтра!