Гистомоноз птиц (histomonosis, тифлогепатит, монилиаз, «гниение печени», «черная голова») – протозойное заболевание, сопровождающееся поражением слепых отростков кишечника и печени, крайне редко – других внутренних органов.
Введение
Возбудитель заболевания Histomonas meleagridis (гистомонады) – простейшие микроорганизмы, относящиеся к роду Mastigamobidae, семейству Histomonas. Благодаря наличию двух фаз вегетативного развития – жгутиковой и амебоидной, гистомонады имеют сходство как с амебой, так и со жгутиконосцами. В жгутиковой фазе возбудитель имеет округлую форму и достигает величины 8–20 мкм. Цитоплазма паразита зернистая, ядро четко дифференцировано и расположено эксцентрично. Передний конец гистомонады в жгутиковой фазе снабжен одним жгутиком, реже 3–4 жгутиками . Устойчивость гистомонад во внешней среде и к действию дезинфектантов очень незначительна. В яйцах гельминтов гетеракисов паразиты способны сохраняться при температуре +4 ºС от одного года до двух лет. К гистомонозу восприимчивы индейки, куры, а также гуси, перепела, цесарки, фазаны и куропатки. Источник инвазии — больные и переболевшие птицы. Основной путь заражения – алиментарный, при этом значительная роль отводится промежуточным хозяевам гистомонад — гельминтам Heterakis gallinarum, их личинкам и яйцам. Механическими переносчиками гистомонад могут быть домашние мухи, кузнечики, травяные блохи. Возбудитель болезни также передается с предметами ухода, инвентарем, обувью, тарой и др. Гистомонады – внеклеточные паразиты. Местом их первичной локализации в организме птиц являются слепые отростки кишечника, в которых рН среды наиболее благоприятна для размножения и развития возбудителя. Внедрившись в стенку слепых отростков кишечника, гистомонады проникают в кровеносные сосуды и гематогенным путем, по портальной системе, достигают печени. При подкожном и внутривенном введении возбудителя возможны поражения легких, почек, печени при одновременном отсутствии патологических изменений в слепых отростках кишечника . Клинические признаки заболевания не характерны, у индеек они появляются на 4–5-й день после заражения нативным материалом и на 7–9-й день при заражении яйцами гетеракисов, содержащих гистомонады. Отмечаются угнетение, слабость, отсутствие аппетита, жажда, диарея, кожные покровы головы синюшные, перья взъерошены. Оперение вокруг клоаки загрязнено фекалиями желтоватого, реже – зеленоватого или коричневого цвета с примесью слизи, крови; фекалии пенистые, иногда с гнилостным запахом. Возможны парезы и параличи. Смертность у молодняка индеек составляет 30–50 %, при неправильно проведенных лечебных мероприятиях или их отсутствии может достигать 100 %. Иногда диарея отсутствует. Заболевание в стаде сохраняется 2 месяца, в течение этого периода видимое выздоровление чередуется с обострением. У взрослых птиц гистомоноз встречается значительно реже и протекает хронически. Различия между самцами и самками индеек в восприимчивости к экспериментальному заражению возбудителем гистомоноза, в том числе с использованием моноэукариотической культуры Histomonas meleagrigis, не установлены. Описаны вспышки гистомоноза с высокой смертностью индеек без проявления клинических признаков болезни даже при 100 % зараженности птиц. Подобные ситуации контролировали ПЦР в реальном времени, для филогенетического анализа использовали секвенирование и метод ИФА. На основании анализа эпизоотологических данных, патолого-морфологических изменений во внутренних органах кур и ПЦР в ряде провинций Китая в 2012–2015 годах гистомоноз чаще регистрировался у цыплят в возрасте 2–3 месяцев. Уровень заболеваемости цыплят составлял, как правило, 10–30 %, а смертность – менее 10 % [12–14]. В Южном Вьетнаме изучали распространенность и характеристики генетического разнообразия изолятов Histomonas meleagridis у кур. Обследование птиц на инвазию H. meleagridis проводили как с макроскопической диагностикой, так и в ПЦР на основе гена 18S рРНК. В целом у 12,9 % птиц, представлявших 19 популяций, наблюдались интенсивные поражения, типичные для гистомоноза, в то время как 25,3 % птиц из других 29 популяций были положительными только по результатам ПЦР-анализа . В последнее время в Европе регистрируется все большее число случаев заболевания кур гистомонозом, что приводит к значительным экономическим потерям. Это в основном вызвано полным отказом в ЕС от эффективных антигистомональных препаратов. В Польше в 2015 году в 10 куриных стадах зарегистрированы вспышки гистомоноза, из них в 8 стадах бройлеров-производителей (средний возраст 33 недели), в 2 стадах коммерческих производителей (средний возраст 38 недель) и у бройлеров линии ROSS 308 в возрасте 16 недель. Отмечалась острая форма инфекции со смертностью птиц, характерными очагами некроза в печени и язвенным тифлитом. Во Франции для изучения степени генетического разнообразия и родства между различными изолятами Histomonas meleagridis проведены молекулярно-генетические исследования образцов, взятых в период с 2007 года по 2010 год включительно из 25 популяций индеек. Одновременно анализировались диагностические образцы из разных европейских стран и Азербайджана, хранившиеся в Вене. Были исследованы три генетических локуса: 18S рРНК, гены α-актинина 1 и rpb1. Для амплификации частичных последовательностей генов α-актинина 1 и rpb1 разработали праймеры, специально предназначенные для H. meleagridis. После ПЦР были проанализированы последовательности 18S рРНК, локусов α-актинина 1 и rpb1. Филогенетический анализ показал разделение изолятов H. meleagridis на два генотипа. Большинство изолятов генотипа 1 произошли из ряда европейских стран. Генотип 2 был редким и преимущественно обнаруживался в образцах из Франции. В мае-июне 2019 г. на ферме в Оренбургской области была зафиксирована повышенная смертность взрослых гусей. По результатам патолого-анатомических и микробиологических исследований в стаде установили три паразитарных заболевания: гистомоноз, эймериоз и гетеракидоз. Такое однократное сезонное и возрастное проявление этих болезней было связано со снижением сопротивляемости организма зимой, с повышенной плотностью посадки птиц и с высокой нагрузкой у самок гусей в период кладки.Патолого-анатомические изменения, характерные для гистомоноза индеек, отмечают, как правило, в слепых отростках кишечника, несколько реже – одновременно в печени и только в единичных случаях – в железистом и мышечном желудках, почках, селезенке, сердце, легких. Поражение одного, а чаще обоих слепых отростков может быть выражено очаговым, реже – диффузным утолщением кишечной стенки, которое в зависимости от тяжести течения болезни сопровождается катарально-десквамативным, геморрагическим или крупозно-дифтеритическим воспалением. На начальных стадиях гистомоноза обнаруживают вздутие слепых отростков, наличие в их стенке узелков размером от просяного зерна до маленькой горошины, очаговые кровоизлияния. Содержимое кишечника жидкое, пенистое, желто-зеленого цвета. На поздних стадиях болезни происходит резкое, неравномерное утолщение стенки слепых отростков, появляется бугристость слизистой оболочки с наличием на ней дифтеритических наложений, которые часто становятся причиной обтурации просвета слепых отростков (последние – в виде «колбасок»). При интенсивных поражениях печень увеличена, полнокровна, пронизана большим количеством некротических узелков величиной от булавочной головки до просяного зерна, желтовато-белого цвета с вдавленным центром. Некротические фокусы могут сливаться и формировать узловатые, величиной с грецкий орех разрастания – очаги серо-белого цвета, выступающие над поверхностью печени. Данные о наличии, механизме и характере иммунитета при гистомонозе ограничены и противоречивы. Допускается возможность формирования определенного уровня иммунитета за счет образования в организме птиц преципитирующих антител, которые кратковременно обеспечивают устойчивость индюшат к реинвазии. Но имеются данные о бурном переболевании и высокой смертности птиц после повторного заражения гистомонозом. Непрямым методом ИФА выявляются антитела к возбудителю гистомоноза, но сведения о строгой зависимости их титра и устойчивости птиц к заражению гистомонозом не указаны. В связи с внеклеточной локализацией паразита выдвинута гипотеза о дифференцировке Т-клеток 2-го типа, специфичных к H. meleagridis. В защите от гистомоноза также участвуют клетки мРНК IFN-γ+. Выявление белка IFN-γ и мРНК IL-13 путем внутриклеточного окрашивания цитокинами и анализа РНК PrimeFlow ™ в CD4+ и CD8β+ Т-клетках проводят на цыплятах, зараженных клональной культурой вирулентного моноксенового штамма H. meleagridis. Эффективность заражения подтверждается характерными патологическими изменениями в слепой кишке птиц и регистрацией H. meleagridis с помощью иммуногистохимии, а также выявлением в сыворотке крови антител, специфичных к данному патогену. При гистомонозе отмечалось увеличение IFN-γ-продуцирующих CD4 − CD8β клеток. Одновременно частота обнаружения клеток, экспрессирующих мРНК IL-13, была низкой даже после стимуляции PMA/иономицином, и в основном эти клетки имели фенотип CD4 − CD8β. При гистомонозе не удалось обнаружить явного увеличения количества клеток IL-13+. В целом приведенные данные свидетельствуют о том, что заражение H. meleagridis индуцирует дифференцировку CD4+ Т-клеток 1-го типа, а также клеток, не являющихся CD4+. В защите от гистомоноза участвуют клетки мРНК IFN-γ+, но фенотип и профиль продукции цитокинов, специфичных для H. meleagridis, Т-клетками – на стадии выяснения. Таким образом, гистомонозная инвазия индуцирует дифференцировку не только CD4+ Т-клеток 1-го типа, но и клеток, не являющихся CD4+. При диагностике гистомоноза учитывают эпизоотологические данные, клинические признаки болезни, результаты патолого-анатомического вскрытия, гистологических и паразитологических исследований. Для выявления гистомонад в помете птиц и содержимом кишечника применяются методы микроскопии нативных мазков («раздавленной капли»), а также мазков, фиксированных в течение 5 минут этиловым или метиловым спиртом и окрашенных азур-эозином по Романовскому – Гимзе. Реже для определения гистомонад в соскобах со слизистой оболочки клоаки или из очагов поражения слепых отростков и печени используются методы фазово-контрастной и фазово-темнопольной микроскопии. Для выявления гистомонад в мазках-отпечатках и, особенно, в гистологических срезах, изготовленных из пораженных органов, целесообразно использовать методику окраски фуксинсернистой кислотой (реактив Шиффа, ШИК-реакция, Pas-реакция), а также ее модификации, позволяющие выявлять вещества углеродной природы (гликоген, нейтральные гликозамигликаны и др.), в большом количестве присутствующие в цитоплазме гистомонад и окрашивающиеся реактивом Шиффа в малиновый цвет. Точной постановке диагноза на гистомоноз способствует культивирование возбудителя, выделенного от больных птиц, на искусственной питательной среде «199» с последующей биопробой на восприимчивой к гистомонозу птице. Разработан непрямой метод сэндвич-ИФА для выявления антител IgG против Histomonas meleagridis в сыворотках крови кур и индеек. При диагностике и дифференциальной диагностике успешно применяются различные варианты ПЦР, генотипирования и секвенирования. C-профилирование – новый метод генотипирования простейших патогенов, основанный на полимеразной цепной реакции и секвенировании богатых AT внутренних транскрибированных последовательностей Spacer-1. Данный метод был применен для генотипирования различных изолятов Histomonas meleagridis, полученных в результате вспышек гистомоноза в шести голландских стадах индеек и кур. Идентифицированы три генотипа H. meleagridis. Тип I и тип II были связаны с клиническим заболеванием. В двух популяциях птиц, переболевших гистомонозом, был обнаружен штамм III типа, который морфологически немного отличался от изолятов I и II типов. C-профилирование является перспективным методом для дифференциации подтипов H. meleagridis, что делает его полезным для эпизоотологических исследований.