Букардо – это один из двух вымерших подвидов пиренейского горного козла (Capra pyrenaica). В настоящее время в Испании свободно обитают два подвида: Capra pyrenaica victoriae, обитающий в Центральной и Северо-западной Испании, и Capra pyrenaica hispanica, обитающий как в Южных, так и в Восточных испанских Средиземноморских горах.
Португальский горный козел (Capra pyrenaica lusitanica) вымер в 1892 году. Популяция же Букардо до последнего времени была многочисленна в Пиренеях, но во второй половине 20-го века резко сократилась. Все попытки по сохранению Букардо, путем запрета охоты, подкормки и т.д. не помогали.
Как следствие, в 1989 году Европейский Союз и местное правительство Арагона осуществили Проект по отлову всех оставшихся Букардо с целью их разведения в неволе. К этому времени в природе осталось только три старых самки. Была предпринята попытка естественной гибридизации трех оставшихся самок с фертильными самцами C. p. hispanica. Две самки забеременели, но потомство на свет так и не появилось. В итоге всех троих отпустили на волю.
Эксперимент по воскрешению Букардо
В 1999 году в живых оставалась только одна самка Букардо в возрасте около 12 лет. У этой самки по имени Селия ученые взяли образцы клеток кожи, размножили их и заморозили в жидком азоте. На Селию надели ошейник с радиомаячком и выпустили на волю доживать отпущенное ей время. 6 января 2000 года ошейник подал сигнал, означающий, что Селия мертва (как оказалось ее придавило деревом). С этого момента Букардо считается официально вымершим.
В 2003 году ученые попытались воскресить это животное путем клонирования. Эмбрионы Букардо были реконструированы следующим путем.
- Из замороженных клеток кожи Селии были извлечены клеточные ядра.
- Из яйцеклеток домашней козы клеточные ядра были удалены.
- Клеточные ядра Селии были помещены в подготовленные яйцеклетки домашней козы.
- Полученные яйцеклетки пересажены в самок диких C. p. hispanica или гибридов диких C. p. hispanica с домашний козой.
Дикие представители C. p. hispanica генетически наиболее близки к Букардо, но масштаб эксперимента вынудил использовать также и домашних коз. В ходе эксперимента было получено несколько сотен эмбрионов (из них 154 были трансплантированы в живых коз), понятно, что такое количество доноров C. p. hispanica получить было сложно, поэтому широко использовались домашние козы. Технология получения эмбрионов Букардо была связана с проведением хирургических процедур, от которых козы-доноры часто погибали.
Результаты эксперимента по клонированию Букардо
В итоге, из 44 коз участвовавших в эксперименте на финальном этапе, 7 коз забеременели, но только одна (гибрид) сохранила беременность до положенного срока (162 дня). У 6 оставшихся беременность самопроизвольно прервалась до 75 дня. Чистые линии диких коз и гибриды беременели с одинаковой частотой.
Через 162 дня беременности, 30 июля 2003 года, ученые провели кесарево сечение и получили первую новорожденную (воскрешенную) самочку генетически чистого Букардо весом 2,6 кг. Новорожденный внешне не имел морфологических отклонений, демонстрировал нормальный сердечный ритм, у него сразу открылись глаза, он двигал ногами, открывал рот и совершал активные движения языком. Последнее, как вскоре выяснилось, было вызвано тем, что новорожденный отчаянно пытался сделать вдох. Борьба за жизнь воскрешенного козленка продлилась всего несколько минут.
При вскрытии обнаружилась серьезная патология легких, в частотности появление дополнительной доли, занимавшей большую часть пространства грудной клетки и не связанную с трахеальным деревом. Больше никаких патологических изменений не наблюдалось ни при анатомо-патологических обследованиях, ни при стандартных гематологических исследованиях.
Выводы
В настоящее время нужно признать, что клонирование является не очень эффективным способом сохранения исчезающих видов. Прежде всего из-за сложности обращения с экспериментальными дикими животными и недостаточных знаний как о клеточных механизмах, задействованных в технике клонирования, так и о репродуктивных характеристиках животных.
Однако у таких видов, как Букардо, клонирование – единственная возможность избежать его полного исчезновения. Этот эксперимент показал, что надлежащее хранение соматических тканей и клеток всех находящихся под угрозой исчезновения видов, крайне важно для будущих попыток воскрешения.
