В 2002 году при принятии плана развития на 5 лет началась разработка преемника 100-й серии. К 2004 году был разработан дизайн. Прототип в период с 2004 по 2007 годы проходил испытания, и в производство был введён в конце 2007 года. Автомобиль получил новые двигатели — улучшенный 2UZ-FE с системой VVT-i (ранее двигатель в такой модификации имел поздний Land Cruiser 100 для рынка США), новый V-образный восьмицилиндровый дизель 1VD-FTV. В Россию на старте продаж поставлялись авто именно с этими двумя двигателями. Для других рынков авто комплектовалось ещё 4,0-литровым двигателем 1GR-FE и 5,7-литровым двигателем 3UR-FE в зависимости от рынка. С 2012 года после первого рестайлинга 2UZ-FE более не устанавливался на авто и был заменён на новый 4,6-литровый двигатель 1UR-FE в том числе и в России. Автомобили поставляются с несколькими вариантами АКПП на 5 ступеней (A750F) для двигателей 2UZ-FE и 1GR-FE, 6 ступеней (AB60F) для двигателей 1UR-FE, 1VD-FTV, 3UR-FE и 8 ступеней (AE80F) для двигател