Компания Диаэм предлагает реактивы для генной инженерии и молекулярной биологии, в том числе индуктор lac-оперона ИПТГ и хромогенный субстрат X-Gal, используемые для проведения бело-голубого скрининга. Метод бело-голубой селекции – это колориметрическая система скрининга, которая основана на экспрессии гена бета-галактозидазы (lacZ) lac-оперона, широко используется при подборе бактериальных трансформантов.
Изопропил-β-D-тиогалактопиранозид, или ИПТГ используют в качестве аналога аллолактозы, метаболита лактозы, который связывается с lac-репрессором и запускает транскрипцию lac-оперона. Для индукции лактозного оперона ИПТГ используют в концентрациях от 0,1 до 2 мМ.
X-gal, или 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-галактопиранозид — хромогенный субстрат для бета-галактозидазы, образующий при гидролизе темно-синий продукт.
Клонирование чужеродного гена в вектор происходит внутрь гена бета-галактозидазы. Поэтому колонии, несущие рекомбинантную плазмидную ДНК, на LB-агаре, содержащем X-gal, выглядят белыми из-за нарушения гена lacZ, а бактерии, не содержащие вставку, образуют синие колонии, так как экспрессируется функциональный ген lacZ.
X-gal также используют для визуализации экспрессии репортерного гена бета-галактозидазы в трансфицированных эукариотических клетках и определения активности бета-галактозидазы в иммунологических и гистохимических исследованиях.
