Это будет очень длинная и нудная статья. Потому что если бы все эксперименты заканчивались положительными результатами, но нет.
Недавно я приобрёл белорусский препарат Триходерма Profit. А тут у Ивана Русских на канале вышел ролик о размножении триходермы на запечённых яблоках. И я решил попробовать размножить свой Profit именно на яблочном пюре, тем более что яблоки были в достатке. Проделав необходимые манипуляции с яблоками, я заселил туда 4 крупинки препарата и стал ждать. Из четырёх уложенных на пюре крупинок что-то начало расти только на одной. Остальные три крупинки в неизменном виде лежали на поверхности яблочного пюре.
И росло оно как-то странно, нехотя, что ли. Создалось впечатление, что не нравится эта питательная среда микроорганизмам, растущим из крупинки. Через несколько дней ситуация в банке с яблочным пюре начала меняться, причём не в лучшую сторону.
Чёрная субстанция – это, скорей всего, мукор, но это не точно. Однако, то, что это совсем не триходерма, сомнению не подлежит. Подождав ещё несколько дней, я получил в банке вот что.
Поскольку то, что получилось, на триходерму совершенно не похоже, пришлось залить всё это перекисью водорода и затем вылить в унитаз. Осталось понять, откуда взялись посторонние грибы.
Есть несколько путей, которыми они могли попасть в банку. Банка и яблочное пюре могли быть недостаточно стерильными. Споры могли попасть в банку из окружающего воздуха. И, наконец, заражённым мог оказаться сам препарат Profit.
Вероятность заражения через банку и через яблоки довольно низкая, потому что яблоки запекались непосредственно в этой банке в течение 20 минут. Попадание спор из окружающего воздуха очень маловероятно, так как время пребывания банки с открытой крышкой было очень кратковременным, а наличие спор в воздухе - под очень большим вопросом. А вот в препарате посторонние микроорганизмы вполне могли быть.
Чтобы выяснить пути попадания посторонних грибов в субстрат, я решил попробовать размножить Триходерму Profit в жидком растворе удобрения, как делал это раньше. Чтобы избежать неожиданностей, выполнил все требования к дезинфекции. Банку и крышку продезинфицировал 6 % перекисью водорода, затем ополоснул 70 % этиловым спиртом.
Набрал 1100 мл воды из фильтра обратного осмоса, добавил туда 5 г (по инструкции) комплексного удобрения...
... треть чайной ложки сахара и четверть чайной ложки поваренной соли. Поставил кипятить на 30 минут. За это время лишние 100 мл воды выкипят, и объём раствора станет ровно (ну, почти) 1 л.
По окончании кипячения сразу же перелил раствор в подготовленную банку и закрыл её крышкой. Жидкость слегка мутная, удобрение не полностью растворимо. Раствор должен остыть.
Раствор остыл, муть осела на дно.
Подготовил чайную ложку, салфетку и спирт.
Протёр ложку спиртом.
"Стерильной" ложкой зачерпнул препарат…
… и засыпал его в раствор.
Цеолит тонет.
Закрыл банку крышкой (не затягивая) и оставил в покое.
Через два дня перемешал содержимое. Взвесь поднялась. Цвет раствора стал чуть розоватым, и непонятно, то ли это от взвеси, то ли от цеолита. Пока никаких признаков размножения триходермы не заметно.
Прошла неделя после заселения препарата в питательный раствор. За это время я несколько раз перемешивал содержимое банки. Сначала через некоторое время осадок ложился на дно. Но потом раствор стал оставаться мутным и после отстаивания. Более того, при ближайшем рассмотрении стали видны некие хлопья, плавающие в толще жидкости.
Значит, что-то в растворе начало размножаться. В принципе, так оно было и раньше при размножении триходермы в жидком растворе. Только проявлялось это чуть быстрее.
Прошло 2 недели с момента заселения препарата в раствор. И что я вижу? Раствор вновь стал прозрачным.
На поверхности раствора плавает нечто, но это не триходерма. Возможно, там размножились какие-то бактерии, но не грибы. Времени прошло немало, при нормальном раскладе триходерма уже должна была вырасти. Следовательно, либо в цеолите, который я вносил, ни триходермы, ни каких-либо иных грибов не было, либо мой питательный раствор непригоден для их размножения. В любом случае эксперимент не удался.
Но мы не привыкли отступать! Наряду с жидким раствором удобрения я сделал крахмальный кисель и заселил в него примерно такую же дозу препарата. Честно говоря, на результат особо не рассчитывал, поэтому фотографировать весь процесс не стал. Снимать начал, только когда на киселе что-то появилось.
И уже через пару дней появились явные признаки роста разных грибов.
Большие серо-зелёные колонии - это пенициллы. Они начали расти раньше всех. Белый пух справа - очень похож на триходерму, тем более что он начал паразитировать на пеницилле. Также на триходерму похожи ярко-зелёные колонии слева, но это другой штамм. Уже веселее, будем наблюдать.
На следующий день картина изменилась.
Грибы занимают пространство очень напористо. Интересно, сможет ли триходерма победить пеницилл?
Ещё через два дня стало так.
Видно, что зелёная триходерма заселила почти всю свободную площадь киселя. А белая почему-то стала серой. Это не триходерма? Справа появилось нечто жёлтое, и это с высокой долей вероятности - триходерма.
Ещё через день ситуация в банке следующая:
Зелёная триходерма заняла почти всю свободную площадь субстрата. Но с пенициллом она, как видно, не воюет. Кстати, кисель стал разжижаться, разделяться на фракции. Скоро питательных веществ будет не хватать на всех.
На следующий день я решил отсадить отдельные (по возможности) штаммы на отдельные питательные среды. На фото пометил зоны, в которых растут разные грибы. В зонах 1 и 3 явно не триходерма, а пеницилл или аспергилл. В зоне 2 проглядывает, скорей всего, жёлтая триходерма. В зоне 5 уже определённо триходерма. И, наконец, в зоне 4 ставший не похожим (а в начале своего роста был здорово похож) на триходерму, скорей всего, аспергилл.
Сначала в банку с крахмальным киселём отсадил фрагменты мицелия из зон 4 и 5. Чуть позже сварил питательную среду на основе агар-агара, содержащую удобрение Fertika Leaf Power, сахар и соль. В банку с твёрдым агаровым субстратом отсадил фрагмент из зоны 2. Посмотрим, что где вырастет.
Прошло ещё 7 дней. Грибы разрослись, но, крахмал уже заканчивается, питания не хватает.
Неожиданно вылезла триходерма в зоне 6, и она по цвету отличается от зелёной из зоны 5. Решил её тоже отсадить на агар.
Что же выросло из отсаженных на отдельные субстраты фрагментов мицелия? Вот так развивались события в банке с двумя фрагментами на крахмальном киселе.
Интересно, что триходерма как бы подлезает под аспергилл, отсекая его от питательной среды.
Зелёная триходерма практически победила. Это хорошо.
А вот что выросло на агаре из мицелия, взятого из зоны 2.
Триходерма из зоны 2 всё-таки жёлтая, только окрашивание происходит не сверху, где мицелий, а снизу.
И, наконец, отсаженный позже всех мицелий из зоны 6 тоже начал размножаться на агаре.
13 декабря я решил, что дальше держать банку с исходными грибами не имеет смысла, так как они уже съели практически весь крахмал, и дальше просто погибнут от голода. Увёз их в огород и вылил на землю в теплице.
Остальные банки оставлю для последующего размножения, всё-таки это с высокой долей вероятности чистые культуры. Наблюдение за поглощением аспергилла триходермой продолжу, интересно же.
Таким образом, можно подвести некоторые итоги эксперимента.
Выводы из эксперимента с печёными яблоками:
- Препарат Триходерма Profit содержит споры грибов, не являющихся триходермой.
- Возможно, не все частицы цеолита в препарате содержат споры грибов.
- Возможно, печёные яблоки оказались селективной средой для посторонних грибов.
Выводы из эксперимента с жидким раствором удобрения Агровита:
- Возможно, не все частицы цеолита в препарате содержат споры грибов.
- Возможно, удобрение Агровита не годится для размножения грибов.
Выводы из эксперимента с крахмальным киселём:
- Препарат Триходерма Profit содержит споры триходермы нескольких штаммов.
- Препарат Триходерма Profit содержит споры грибов, не являющихся триходермой.
- Крахмальный кисель не совсем удобен для проведения экспериментов, так как он недостаточно густой сразу после приготовления, и становится совершенно жидким через некоторое время после начала роста грибов.
Выводы из эксперимента с твёрдой питательной средой, содержащей удобрение Fertika Leaf Power:
- Удобрение Fertika Leaf Power пригодно для изготовления не только жидкой питательной среды, но и твёрдой, на основе агар-агара.
- Для экспериментов твёрдая питательная среда оптимальна.