Всем привет! На связи Медицинский научпопер. В прошлой статье я рассказала, что такое антигены и антитела. Тыкайте сюда, если не читали её :)
А в этой расскажу, как проводится иммуноферментный анализ – с помощью которого можно определить антитела в крови. Это актуально, потому что сейчас популярен анализ на антитела против коронавируса.
Я не буду рассказывать о том, куда надо пойти и что сделать, чтобы сдать анализ - таких статей в интернете полно. Я предлагаю заглянуть в святая святых и подглядеть сам механизм анализа! Итак, поехали.
Анализ основан на том, что антиген и антитело могут связываться и образовывать комплекс. Кроме этих двоих, нам ещё понадобятся фермент и субстрат. Субстрат – это тот парень, который окрашивает пробу или заставляет её светиться, а фермент ему в этом помогает.
Вариантов ИФА много, поэтому я расскажу про один – самый распространённый. Он называется непрямой ИФА.
1. Берём твёрдую фазу – обычно это пластмассовый планшет с лунками. Адсорбируем в лунки антиген, против которого мы ищем антитела. Затем отмываем планшет от несвязавшихся с пластмассой антигенов.
2. У нас остались участки пластмассы, которые ещё могли бы что-нибудь связать. Нам это не нужно, потому что это может дать неправильный результат. Это называется свободные места связывания. Мы их блокируем – например, с помощью белков, которые не помешают реакции. Первые 2 пункта обычно выполняют на заводе и готовые планшетки с антигенами доставляют в лаборатории.
3. Добавляем в лунки исследуемый материал. В нашем случае – сыворотку крови, чтобы узнать, есть там антитела или нет. Инкубируем это всё дело. В это же время ставим положительный и отрицательный контроль – то есть, берём ещё две планшетки с антигенами, и в одну из них добавляем сыворотку, в которой точно есть антитела, а в другую – в которой точно их нет. Это нужно, чтобы потом сравнить результаты.
4. Если в сыворотке были антитела, они свяжутся с антигенами и образуют комплексы. Несвязанные антитела нужно отмыть.
5. А сейчас будет сложно – приготовьтесь вникать. Нам понадобятся антиантитела, или по-другому, антиглобулины. Это такие штуки, которые выступают антителами против наших антител. Нам нужны не просто антиглобулины, а меченые ферментом. Антиглобулин вместе с ферментом образуют конъюгат.
6. Добавляем конъюгат к нашим образцам, инкубируем. Антиглобулин должен связаться с антителами. Несвязавшиеся остатки отмываем.
7. Добавляем субстрат, инкубируем. Фермент заставляет субстрат окрашиваться или флюоресцировать. Мы следим за интенсивностью окрашивания, и в конце-концов можем добавить стоп-раствор, который остановит реакцию.
Прибор ИФА-ридер измеряет концентрацию антител в сыворотке.
Всё понятно? Если бы в самом начале в сыворотке крови не было антител, то никаких комплексов бы не образовалось, и всё просто смылось бы, когда мы отмывали несвязавшиеся компоненты. Значит, не осталось бы ферментов, которые заставляют субстрат окрашиваться, и наш образец не поменял бы цвет.
Итог: образец окрасился – есть антитела.
Образец не окрасился – нет антител.
Это мы разобрали непрямой ИФА. Как ни странно, в прямом получается наоборот: образец окрашивается, если результат отрицательный.
А ещё таким образом можно определять не только антитела в крови, но и антигены. Тогда на планшетку мы вместо антигенов адсорбируем антитела, а сам метод может немного отличаться.
Но главный принцип – образование комплекса «антиген-антитело» - остаётся всегда.
Есть ещё экспресс-тест на антитела, который работает почти также, как и тест на беременность, и покажет вам результат через 15 минут. Он не скажет, сколько у вас антител, а только покажет: есть они или нет. Но это уже совсем другая история :)
Также предлагаю вам почитать о том, как работают стандартные тесты на коронавирус в этой статье.
Подписывайтесь на канал, чтобы не пропустить ничего интересного😊