Вспомогательные акции: Тоник Неподвижность (TI)
Модифицированный вариант методологии ТИ, предложенный Джонсом (56), был использован для измерения страха у цыплят в возрасте 9 недель (N = 466). Цыплят отлавливали индивидуально, перемещали в тихую комнату поблизости и помещали на спину в V-образную колыбель, где экспериментатор мягко надавливал на грудную кость. Если неподвижность продолжалась минимум 10 с, то это считалось успешной индукцией. Если нет, то было выполнено до трех последовательных попыток индукции. Каждое испытание длилось 10 минут или до тех пор, пока птица не встала. Данные собирались только у потомства кур 52 и 72 недель. Тестирование проводилось с 09:00 до 12:00 и с 13:00 до 16:00 часов, а процедура записывалась с помощью видеокамеры (Panasonic HC-V180K), которая была расположена перпендикулярно колыбели. Поведение анализировалось на видео и включало в себя продолжительность до тех пор, пока птица сама не встанет на ноги, количество вокализаций, излучаемых во время теста, и количество индукций, необходимых для достижения успешной индукции. Данные анализировались двумя обученными наблюдателями, слепыми к лечению.
Хотя термин TI подразумевает в состоянии пониженной восприимчивости, которая включает подавление вокального поведения и прерывистые периоды закрывания глаз и мышечного дрожания в конечностях, в течение всего теста могут наблюдаться различные реакции (например, вокализация и движение головы). Как описано Рове и Лучиано, TI можно классифицировать в три этапа: На стадиях 1 и 2 могут раздаваться сигналы бедствия, а глаза либо открываются, либо иногда трепещут веками. В то время как на стадии 3 наблюдается полное закрытие глаз, отсутствие вокализации, качание головы и периодическое генерализованное подергивание тела. Поскольку эти поведения могут варьироваться в зависимости от различных методик [которые могут влиять на валидность теста], данные за время 3-й стадии ТИ, которые будут конкретно называться "3-й стадией ТИ" по всему тексту, были зафиксированы и проанализированы отдельно.
Статистический анализ
Для проведения всех статистических анализов использовалась процедура Glimmix SAS 9.4 (Институт SAS, Кэри, NC). Основная статистическая модель в ANOVA включала фиксированные эффекты лечения (Control, MS, Vehicle и CORT), штаммы (коричневые 1 и 2, белые 1 и 2, и белые Leghorn), пол, а также лечение путем взаимодействия штаммов. Случайные эффекты включали в себя материнский возраст (32, 52 и 72 недели) и ручку (10 ручек), вложенную в комнату (4 комнаты), с потомством птицы в качестве экспериментального блока. Дальнейшие заранее запланированные сравнения включали лечение (Контроль против МС, Контроль против транспортного средства и Контроль против КОРТ) и штаммы белого против коричневого цвета. Тесты на нормальность включали в себя измерения Шапиро-Вилка и Андерсона Дарлинга в сочетании с визуальными графиками. При обнаружении значительного штамма в результате взаимодействия с обработкой анализы контролировались на множественную погрешность тестирования с использованием процента ложноположительных срабатываний, что оценивало скорость обнаружения ложных срабатываний [FDR]. Значение было объявлено при P < 0.05. Надежность между наблюдателями (все слепые к лечению) вычислялась с использованием коэффициента Тау-Б Кендалла. Значение Кендалла τ, равное 1.0, считается идеальным соотношением, а значение 0.7 - приемлемым. Следовательно, баллы, выставленные за СИ (Кендалл τ = 0.93; Р < 0.001) и длительность ТИ (Кендалл τ = 0.82; Р < 0.001) указывают на согласие среди наблюдателей.
Социальная изоляция
Данные СИ были подвергнуты базовой модели и лог-нормально преобразованы в соответствии с предположением о нормальном распределении остатков. Коррекция значимости после РДР была установлена на P < 0.005 и затем был проведен анализ мощности (альфа = 0.005). Средства с наименьшим квадратом (LS-) и стандартной погрешностью средств (SEM) были обратно преобразованы и представлены в результатах как среднее значение вокализаций дистресса.
Тоническая неподвижность
Длительность неподвижности и количество вокализаций были подвергнуты базовой статистической модели в ANOVA. Для соответствия предположению о нормальном распределении остатков данные за длительность подвергались логнормальному преобразованию, а данные вокализации трансформировались арксинусом квадратного корня. Случайные эффекты были сгруппированы по деформациям. LS-Means и стандартное отклонение (SD) обоих тестов были обратно преобразованы и представлены в результатах как средняя длительность TI в секундах и среднее количество вызовов, поступивших во время теста. Количество попыток, необходимых для индукции, представлено в процентах от птиц; данные были подвергнуты преобразованию Пуассона, но не были нормально распределены, когда модель включала штамм путем взаимодействия лечения. Таким образом, использовалась более простая статистическая модель, содержащая только обработку в виде фиксированного эффекта. Различия между LS-средствами проверялись с помощью теста хи-квадрат. В связи с небольшим количеством птиц, индуцированных в 3-ю стадию TI (n = 41), остатки для измерения длительности не были нормально распределены, когда модель включала штамм путем взаимодействия с обработкой.
