Родительские запасы: Уход за транспортными средствами и КОРТ-обслуживание
Обработка CORT направлена на увеличение концентрации кортикостерона в оплодотворенных яйцах от племенных кур. Согласно предыдущим исследованиям, базальный уровень кортикостерона у кур-несушек колеблется от 0,3 до 5 нг/мл, достигая 30 нг/мл в ответ на стресс. Ранее сообщалось, что концентрация кортикостерона в яичных желтках варьировалась от 0,77 до 2,8 нг/г у Hy-Line Brown до в среднем 1,6 нг/г у Hy-Line White (47) и 2,13 нг/г у Bovan White в условиях контроля. Средняя концентрация кортикостерона в яйцах от нестрессовой птицы ранее составляла 1,17 нг/г в желтке и 1,55 нг/мл в белке. Однако аналитическая валидация методов ферментного и радиоиммунологического анализа показала наличие перекрестно-реактивных веществ, препятствующих количественной оценке кортикостерона в желтке и белке яиц. Кроме того, недавняя работа показала, что даже при проведении более точных методик, таких как Целит или ВЭЖХ, их может быть недостаточно. Поэтому, поскольку точная концентрация кортикостерона в яйцах остается неизвестной, мы следовали методике, предложенной Янчаком и др. и модифицированной Пейшото и др., которая была основана на плазменной концентрации кортикостерона в курах. Использовались инъекции 10 нг/мл кортизола, разбавленного в кунжуте (обработка КОРТ) или только в кунжутном масле (обработка с помощью транспортных средств). При подготовке к этой процедуре на базальный наконечник оболочки (2 см длиной × 1 см шириной) подвыборки контрольного яйца за 1 день до инкубации яйца был намазан слой силиконового герметика (General Electric, Бостон, МА), который поможет предотвратить газообмен и загрязнение после перфорации и впрыскивания через оболочку. Утром каждого инкубационного дня готовились автомобильный раствор и раствор КОРТ. Средний вес яйца, который, по оценкам, составляет 90% от общей массы яйца, составлял 50, 50 и 59 г на куриную возрастную группу; таким образом, в яйца 32- 52-недельных заводчиков вводилось 50 мкл растворов КОРТ или автомобильных растворов, а 72-недельным заводчикам - 60 мкл. Инъекции производились стерильной иглой 23 калибра через небольшое отверстие, которое проделывалось через слой силикона с помощью яичного пирсера. Яйца от всех обработок были немедленно инкубированы.
Вспомогательные запасы: Управление и сбор данных
Сбор, инкубация и вылупление яиц происходили в одинаковых условиях для всех групп потомства. Птенцы каждого материнского возраста были индивидуально вылуплены на крыльях. Размещение птенцов от каждого штамма и лечение было рандомизировано по комнатам 40 загонов, равномерно распределенным по четырем комнатам. Каждый загон (3,72 м2) был обогащен окунем (длина: 155 см) и подстилкой. Каждый репликат по времени состоял из двух загонов с 20 птицами каждый (10 самок: 10 самцов) на обработку и штамм; однако конечная плотность варьировалась из-за более низкой выводимости инъекционных яиц. Заказы на проведение процедур, описанных ниже, были сбалансированы в течение дня для всех стад, штаммов и обработок, чтобы свести к минимуму влияние времени и циркадного ритма на результаты.
Вспомогательные запасы: Социальная изоляция (SI)
Социальное разделение молодых цыплят от их конспецифики приводит к увеличению вокализации дистресса и анальгезии, вызванной стрессом, что позволяет измерять поведение, связанное с тревогой. По методике, предложенной Суфкой и др., цыплята в возрасте от 5 до 10 дней (N = 701) были индивидуально помещены в квадратную звуконепроницаемую коробку (высотой 63,5 см × 63,5 см глубиной × 63,5 см шириной), в которой были зафиксированы их вокализации. Коробка была сконструирована из массивных панелей, покрытых акустической тканью, и оснащена пятью светодиодными лампами и микрофоном, наклеенным на потолок для записи. Звукозапись длилась 5 минут и велась с 08:00 до 12:00 и с 14:00 до 18:00 в тихой комнате рядом с домашней ручкой цыпочек. Звонки в случае аварии записывались и сохранялись в виде файла MPEG-4 с помощью приложения "Голосовые заметки" (Apple, Купертино, США). Общее количество вызовов бедствия, исходящих от цыпочек, было подсчитано тремя наблюдателями, слепыми к обработке с помощью WavePad (NCH Software, Гринвуд Виллидж, США).
