Итак, вернемся к теме Восстанавливающейся плазмы и моноклональных антител.
Связывающие эпитопы некоторых хорошо изученных mAbs дают ценную информацию для механизма нейтрализации и клинических последствий. Большинство mAbs нацелены на RBD белка спайка и предотвращают вирусную привязанность. Например, mAb 80R способен защитить как в пробирке, так и 16-недельную модель мыши от SARS-CoV Urbani. Однако она не в состоянии защитить другие штаммы из-за вариаций аминокислот в БДТ. С другой стороны, S230.15 имитирует связывание рецепторов и вызывает конформационные изменения в SARS S-протеине, полностью защищая молодых и старых мышей от множественных SARS-CoV, включая Urbani, GD03 и SZ16. Подобно SARS-CoV, большинство mAbs, нацеленных на MERS-CoV, такие как MERS-4, MERS-27, m336 и гуманизированные Ab 4C2 и 2E6, нацелены на БОРД и предотвращают связывание вируса с DPP4 с высокой эффективностью. Интересно, что mAb LCA60, выделенный из MERS-CoV инфицированного пациента, связывается с регионом БКД и дает более широкий нейтрализующий охват, а также способен нейтрализовать штаммы ЕМС2012 и Лондона1 MERS-CoV. Штаммы Abs G2 и G4, не относящиеся к ББД, распознают область S1 и S2 MERS-CoV, соответственно, показывая перекрестную реакцию с несколькими вариантами MERS-CoV, и могут защитить мышей, индуцированных hDPP4, от проблем. Два нанотела, изолированные от верблюдов, NbMS10 и HCAb-83, демонстрируют потенцию трансгенных мышей hDPP4, снижая потерю веса и увеличивая выживаемость после вызова. Интересно, что NbMS10 способен защитить мышей в качестве терапевтического лечения 3 дней после заражения.
В то время как многие мАб показывают перспективные свойства для клинического использования, два мАб, REGN3048 и REGN3051, завершили фазу 1 клинических испытаний (NCT03301090). Эти две mAbs были изолированы от мышей VelocImmune (выражающих переменные области человеческой Ig тяжелой и каппа легкой цепи), иммунизированных MERS S-протеином. Оба mAbs демонстрируют пикомолярное связывание и ингибирование трансдукции псевдо-частиц MERS на клетках Huh7. REGN3048 способен нейтрализовать семь природных изолятов S-вариантов, а IP-инъекция mAb за 1 день до или после вызова снижает уровень MERS-CoV РНК и легочную патологию в трансгенной модели мыши hDPP4. Учитывая острую тяжелую фазу, которая ассоциируется с возникающими инфекциями CoV, основное препятствие для терапевтических антител и лекарственных средств заключается в том, что раннее назначение, вероятно, окажется наиболее эффективным в клинической практике, как это также было показано в случае с вирусом гриппа, вирусом Эбола и иммунотерапией RSV.
Фузии и ингибиторы вирусных протеаз
Еще одним критическим этапом для жизненного цикла КОВ является слияние мембран и последующее высвобождение генома РНК для репликации. Мембранный синтез CoVs регулируется доменом S2 S-белок. Стебель S2 претерпевает значительные конформационные изменения в двух областях повторения гептада (HR1 и HR2), чтобы привести хозяина и вирусную мембрану в непосредственную близость для образования пор слияния. Множественные пептидомиметические ингибиторы слияния, имитирующие HR1 и HR2 либо SARS-CoV, либо MERS-CoV, блокируют образование винтового ядра и эффективно ингибируют слияние мембран в микромолярном диапазоне. В одном отчете показано лечение пептидом HR2 за 5 часов до вызова MERS-CoV в трансдукционной мышиной модели Ad5-hDPP4 снижает вирусный титр легких. Способность этих препаратов защищать в смертельных моделях мышей с высоким титром еще предстоит доказать.
Гены оВ nsp3 и nsp5 кодируют папаин-подобную цистеиновую протеазу (PLpro) и 3C-подобную сериновую протеазу (3CLpro) соответственно. PLpro расщепляет полипротеин и разделяет его на nsp1-4, в то время как 3CLpro разделяет nsp4-16. Поскольку переработка полипротеина является критическим этапом для репликации и транскрипции КОВ, вирусные протеазы являются высокоприоритетными мишенями для лекарственных препаратов. Вирусные протеазы, изначально разработанные как ингибиторы ВИЧ-протеазы, обладают низкой микромолярной активностью по отношению к 3CLpro как ТОРС-коВ, так и МЕРС-коВ in vitro. Тестирование на больных с ТОРС-коВ инфекцией показало положительные результаты, включая снижение вирусной нагрузки, уменьшение начала АРДС и снижение смертности при лечении ЛПВ и МРТВ (см. аналоги нуклеозидов).