Трансмиссионная электронная микроскопия
Среднее количество и общий объем митохондрий в расчете на одно поле для групп 1е4 приведены в табл. 3. Группа 2 имела наименьшее количество митохондрий на поле, но наибольший средний объем на митохондрию. Группа 4 (контрольная) имела наибольшее среднее число и общий объем митохондрий, но наименьший объем на митохондрии в расчете на одно поле, а также наибольший средний объем на митохондрии в расчете на одно поле митохондрии. Митохондрии обычно становятся большими и округлыми, когда потеря целостности их мембран приводит к накоплению флюида. Эти измерения позволяют предположить, что во 2-й группе митохондрии были более крупными, эдематозными, поврежденными по сравнению с группами, получавшими либо селенитовую добавку (3-я группа), либо меньшую дозу трастузумаба (1-я и 4-я группы).
При ультраструктурном обследовании было отмечено несколько отличий по сравнению с контролем. В группе 1 (разовая доза трастузумаба), есть доказательства нарушения миофибрилля и дезорганизация митохондриальных элементов. Во 2-й группе (четыре дозы трастузумаба) митохондрии округляются с увеличением пространства между кристаллами, признаками отека. Некоторые митохондрии демонстрируют разрыв внешних и/или внутренних мембран митохондрий, что приводит к выдавливанию их матрицы. Электрон-плотные частицы рассеиваются внутри митохондрий. В группе 3 (селенит четыре дозы трастузумаба) имеется меньше признаков отека и дезорганизации, чем во 2-й группе.
Эхокардиография
Измерения были доступны до и после лечения кроликов в группах 1e3, что позволило им служить собственными кон- тролями для эхокардиографии. Восемь из одиннадцати животных имели клинико-каллиграфические изменения (10%) в их LVEF, но измерения варьировались между животными. Только группа 2, получившая четыре дозы трастузумаба, по-видимому, имела последовательную картину снижения LVEF.
Обсуждение
У кроликов, получавших четыре подкожных инъекции трастузумаба, развивались морфологические изменения сердечной ткани по рутинной гистопатологии и изменения со всеми кумулятивными дозами трасту-зумаба, визуализированными с помощью ТЭМ. Отек, разделение и разрушение кристаллов, а также нарушение митохондриальных мембран и мио-фибриллы были визуализированы при 8000 намагничивание на TEM. Аналогичные изменения наблюдались при окислительном стрессе в других исследованиях. Степень этих изменений на ТЭМ была значительно меньше в группе, которая получала предварительную обработку пероральным селенитом натрия в воде. Количество и размер митохондрий также варьировали между группами, поддерживая эффекты trastuzumab, которые смягчались селенитом натрия.
В дополнение к этим изменениям, концентрации селена были значительно снижены в сердечной ткани обработанных трастузумабом кроликов, которые не получали добавки. Более низкие уровни селена в тканях могли поставить под угрозу функцию глутатионпероксидаз, тем самым снижая его антиоксидантную способность. Аналогичный эффект наблюдался и в предыдущем исследовании с использованием антрациклинов. Данное пилотное исследование позволяет предположить, что окислительный стресс трастузумаба-апи приводит к потреблению глутатионпероксидаз и селена, что приводит к накоплению свободных радикалов, ультраструктурным изменениям в митохондриях и обратимым снижениям сердечной сократимости.
У двух кроликов в 3-й группе (трастузумаб селена в дозах 4) в исходном состоянии была снижена ЛВЭФ, которая после лечения оставалась ниже нормы. Один кролик в группе 2 (4 дозы trastuzumab) развивается снижение LVEF к концу исследования. Другие кролики имели изменения в LVEF, но оставались в пределах нормы. Мы не можем сделать никаких выводов о влиянии супер-добавок селена, учитывая наш небольшой размер выборки и непредсказуемость развития трастузумаба кардиотоксичности у человека.
Наше исследование имеет несколько потенциальных ограничений. Мы изучали небольшое количество животных, что ограничивало статистическую силу наших ан-ализ. Это было преднамеренным; наше исследование было разработано в качестве пилотного исследования для изучения нашей гипотезы, прежде чем взять на себя обязательства по проведению более крупных исследований. Таким образом, мы также ограничили количество проведенных экспериментальных тестов. Например, мы не измеряли уровень или активность глутатиона, пероксидазы в сердечной ткани, так как разумно предположить, что концентрация селена коррелирует с активностью ферментов. Дальнейшие исследования выиграют от дополнительных мер окислительного стресса и изменения функции митохондрий.
Мы не смогли установить потребление воды с содержанием селена отдельными кроликами в группе 3, потому что они были размещены в общественном месте, в соответствии с требованием Комитета по использованию животных. После добавления были аналогичные уровни среди кроликов 3-й группы. Хотя исходные уровни селена в сыворотке крови варьировались в группах 1e3, после введения свинца в этот период уровни были одинаковыми среди всех кроликов.
Мы использовали подкожное введение трастузумаба из-за его удобства и переносимости у животных, а не внутривенное введение, используемое для людей в США. Однако в Европе трастузумаб регулярно вводят подкожно человеку, при тех же клинических признаках и аналогичных неблагоприятных явлениях .
Морфологические изменения, наблюдаемые при гистопатологии и ТЭМ, возможно, были связаны с эвтаназией, связанной с сердечным стрессом или апоптозом после жертвоприношения. Специфических временных ограничений для интервалов выборки не установлено. Согласованность морфологических изменений в группах, однако, предполагает, что эти изменения были связаны с лежащими в основе экспериментальных условий.