Найти тему
Владимир Краснов
85 подписчиков

Дофамин ослабляет липополисахарид-индуцированную экспрессию провоспалительных цитокинов путем ингибирования...

1
1 мин
Оглавление

Продолжение

Далее мы исследовали влияние NAC на дофамин-опосредованное ослабление индуцированного ЛПС повышения ядерного уровня NF-kB p65. NAC (10 мм) ингибировал дофамин-индуцированное ослабление повышения ядерного уровня NF-kB p65 с помощью ЛПС (10 мкг/мл; фиг. 7 А и Б). Эти результаты позволяют предположить, что дофамин уменьшал ядерную транслокацию NF-kB p65 через образование хинона дофамина в клетках BV-2.

7. Влияние NAC на дофамин-индуцированное ингибирование ядерной транслокации NF-kB в клетках BV-2 А) клетки BV-2 обрабатывали в течение 24 ч 30 мкм дофамином (DA) в отсутствие или присутствии 10 мм NAC. Затем клетки обрабатывали 10 мкг / мл ЛПС в течение 1 ч. клетки собирали и подвергали субклеточному фракционированию. Фракции анализировали методом вестерн-блоттинга с использованием антитела против NF–kB p65. для контроля нагрузки использовали окраску β-актином и CBB. Результаты показывают представитель 3 независимых экспериментов. B) уровень NF-kB p65 в ядерной фракции был количественно определен методом денситометрии и выражен как относительный к максимальному уровню, который был произвольно установлен как “1,0."Результаты показывают среднее значение ± S. E. M., полученные из 3 независимых экспериментов и были проанализированы с помощью односторонней ANOVA с последующим HSD-тестом Tukey's post hoc. ** P
7. Влияние NAC на дофамин-индуцированное ингибирование ядерной транслокации NF-kB в клетках BV-2 А) клетки BV-2 обрабатывали в течение 24 ч 30 мкм дофамином (DA) в отсутствие или присутствии 10 мм NAC. Затем клетки обрабатывали 10 мкг / мл ЛПС в течение 1 ч. клетки собирали и подвергали субклеточному фракционированию. Фракции анализировали методом вестерн-блоттинга с использованием антитела против NF–kB p65. для контроля нагрузки использовали окраску β-актином и CBB. Результаты показывают представитель 3 независимых экспериментов. B) уровень NF-kB p65 в ядерной фракции был количественно определен методом денситометрии и выражен как относительный к максимальному уровню, который был произвольно установлен как “1,0."Результаты показывают среднее значение ± S. E. M., полученные из 3 независимых экспериментов и были проанализированы с помощью односторонней ANOVA с последующим HSD-тестом Tukey's post hoc. ** P

3.4. Дофамин ослабляет ЛПС-индуцированную экспрессию цитокинов путем ингибирования ядерной транслокации NF-kB p65 в клетках микроглии мыши в первичной культуре

Далее мы исследовали влияние дофамина на ЛПС-индуцированную экспрессию цитокинов в клетках микроглии мыши в первичной культуре. Допамин (1-100 мкм) и ЛПС (1 нг/мл) не обладали какой-либо цитотоксичностью по отношению к клеткам (см. дополнительную фиг. S4). Предварительная обработка клеток дофамином (1-100 мкм) в течение 24 ч ослабляла индуцированную ЛПС (1 нг/мл) экспрессию мРНК цитокинов ( ФНО-α, Ил-1β и ИЛ-6) концентрационно-зависимым способом (Рис.2). 8С). Далее мы исследовали уровни NF-kB p65 и IkBa в каждой субклеточной фракции этих клеток микроглии мыши в первичной культуре. Лечение ЛПС (1 нг / мл ) в течение 1 ч повышало ядерный уровень NF-kB p65 и снижало уровень IkBa в лизате цельной клетки ( Рис.2). 8 D-F). Предварительная обработка 10 мкм дофамином ослабляла ЛПС (1 нг/мл )-индуцированное повышение ядерного уровня NF-kB p65, но не влияла на ЛПС (1 нг / мл)- индуцированное снижение уровня IkBa в лизатах всей клетки. Эти результаты свидетельствуют о том, что дофамин аттенуировал ЛПС-индуцированную экспрессию мРНК цитокинов путем ингибирования ядерной транслокации NF-kB p65 не только в клетках BV-2, но и в клетках микроглии мыши в первичной культуре.

8. Дофамин ослаблял экспрессию ЛПС-индуцированных мРНК цитокинов путем ингибирования ядерной транслокации NF-kB p65 в клетках микроглии мыши в первичной культуре (A-C) первичные культуры клеток микроглии мыши обрабатывали дофамином (DA) в указанных концентрациях в течение 24 ч. Затем клетки обрабатывали 1 нг/мл ЛПС в течение 9 ч. уровни мРНК TNF-α (A), IL-1β (B) и IL-6 (C) исследовали методом РТ-ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК цитокинов нормализовались до этого уровня мРНК β-актина и были выражены относительно контрольного уровня, который произвольно устанавливался как " 1,0."Результаты показывают среднее значение ± S. E. M., полученные из 4 независимых экспериментов и были проанализированы с помощью односторонней ANOVA с последующим HSD-тестом Tukey's post hoc. * P < 0,05, * * P < 0,01, достоверно отличается от 1 нг/мл ЛПС. (D) клетки микроглии мыши в первичной культуре обрабатывали 10 мкм DA в течение 24 ч. Затем клетки обрабатывали 1 нг / мл ЛПС в течение 1 ч. клетки собирали и подвергали субклеточному фракционированию. Уровни NF-kB p65 и IkBa в каждой фракции были исследованы методом Western blotting. для контроля нагрузки использовали окраску β-актином и CBB. Результаты показывают представитель 4 независимых экспериментов. (E, F) уровень NF-kB p65 в ядерной фракции (E) и уровень IkBa во всем клеточном лизате (F) были количественно определены с помощью денситометрии и выражены как относительный к максимальному уровню или к контрольному уровню, соответственно, который был произвольно установлен как “1,0."Результаты показывают среднее значение ± S. E. M. полученные из 4 независимых экспериментов и были проанализированы с использованием односторонней ANOVA с последующим HSD-тестом Tukey's post hoc. * P < 0,05, * * P (G–I) первичные культуры клеток микроглии мыши обрабатывали в течение 24 ч 10 мкм дофамином в отсутствие или присутствии 10 мм NAC. Затем клетки обрабатывали 1 нг / мл ЛПС в течение 9 ч. уровни мРНК ФНО-α (G), Ил-1β (H) и ИЛ-6 (I) исследовали методом РТ-ПЦР в реальном времени. Уровень мРНК цитокинов нормализовался до этого уровня β-актиновой мРНК и выражался как относительный к контрольному уровню, который произвольно устанавливался как " 1,0."Результаты показывают среднее значение ± S. E. M., полученные от 3 до 4 независимых экспериментов и были проанализированы с помощью односторонней ANOVA с последующим HSD-тестом Tukey's post hoc. ** P
8. Дофамин ослаблял экспрессию ЛПС-индуцированных мРНК цитокинов путем ингибирования ядерной транслокации NF-kB p65 в клетках микроглии мыши в первичной культуре (A-C) первичные культуры клеток микроглии мыши обрабатывали дофамином (DA) в указанных концентрациях в течение 24 ч. Затем клетки обрабатывали 1 нг/мл ЛПС в течение 9 ч. уровни мРНК TNF-α (A), IL-1β (B) и IL-6 (C) исследовали методом РТ-ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК цитокинов нормализовались до этого уровня мРНК β-актина и были выражены относительно контрольного уровня, который произвольно устанавливался как " 1,0."Результаты показывают среднее значение ± S. E. M., полученные из 4 независимых экспериментов и были проанализированы с помощью односторонней ANOVA с последующим HSD-тестом Tukey's post hoc. * P < 0,05, * * P < 0,01, достоверно отличается от 1 нг/мл ЛПС. (D) клетки микроглии мыши в первичной культуре обрабатывали 10 мкм DA в течение 24 ч. Затем клетки обрабатывали 1 нг / мл ЛПС в течение 1 ч. клетки собирали и подвергали субклеточному фракционированию. Уровни NF-kB p65 и IkBa в каждой фракции были исследованы методом Western blotting. для контроля нагрузки использовали окраску β-актином и CBB. Результаты показывают представитель 4 независимых экспериментов. (E, F) уровень NF-kB p65 в ядерной фракции (E) и уровень IkBa во всем клеточном лизате (F) были количественно определены с помощью денситометрии и выражены как относительный к максимальному уровню или к контрольному уровню, соответственно, который был произвольно установлен как “1,0."Результаты показывают среднее значение ± S. E. M. полученные из 4 независимых экспериментов и были проанализированы с использованием односторонней ANOVA с последующим HSD-тестом Tukey's post hoc. * P < 0,05, * * P (G–I) первичные культуры клеток микроглии мыши обрабатывали в течение 24 ч 10 мкм дофамином в отсутствие или присутствии 10 мм NAC. Затем клетки обрабатывали 1 нг / мл ЛПС в течение 9 ч. уровни мРНК ФНО-α (G), Ил-1β (H) и ИЛ-6 (I) исследовали методом РТ-ПЦР в реальном времени. Уровень мРНК цитокинов нормализовался до этого уровня β-актиновой мРНК и выражался как относительный к контрольному уровню, который произвольно устанавливался как " 1,0."Результаты показывают среднее значение ± S. E. M., полученные от 3 до 4 независимых экспериментов и были проанализированы с помощью односторонней ANOVA с последующим HSD-тестом Tukey's post hoc. ** P

Наконец, мы изучили влияние NAC на снижение ЛПС-индуцированной мРНК и экспрессии белков цитокинов дофамином и обнаружили, что он является ингибирующим ( Рис.2). 8 Г-Л). Эти результаты позволяют предположить, что дофамин ослаблял ЛПС-индуцированную экспрессию цитокинов через образование хинона дофамина также в клетках микроглии мыши в первичной культуре.