2.6. Записи потенциала действия в желудочковых препаратах
Чтобы выяснить, было ли прямое влияние XE991 на миоциты желудочков крыс, мы записали потенциалы действия, как описано ранее ( Abramochkin et al., 2018). Крысам проводили анестезию с внутрибрюшинным введением 80 мг / кг кетамина и 10 мг/кг ксилазина. Гепарин (1000 ЕД / кг) добавляли в растворы анестетиков для предотвращения свертывания крови в коронарных сосудах иссеченного сердца. После вскрытия грудной клетки сердце быстро иссекали и промывали раствором Тирода следующего состава( в мм): NaCl 118,0, KCl 2,7, NaH 2 PO4 2,2, MgCl 2 1,2, CaCl 2 1,2, NaHCO 3 25,0, глюкоза 11,0, барботаж с газом карбогена (95% О2 + 5% СО2), ПЭ-аш 7,4. Препараты правого предсердия (включая межпредсердную область) выделяли и фиксировали эндокардиальной стороной до дна экспериментальной камеры (3 мл), перфузированной раствором Тирода (10 мл/мин, 37,5 °С). Поскольку препараты правого предсердия содержали синоатриальный узел, они спонтанно бились на протяжении всего эксперимента.
Через 1 ч уравновешивания в перфузионной камере регистрировали трансмембранные потенциалы с эндокардиальной поверхности препаратов острыми стеклянными микроэлектродами (30-45 МОМ), заполненными 3M KCl, подключенными к высокому входному импедансу усилителя модели 1600 (A-M Systems, Sequim, WA, USA). Сигнал оцифровывали и анализировали с помощью специального программного обеспечения (L-card, Россия; DI-Soft, Россия; Synaptosoft, США). Стабильные наколки поддерживались в течение всего периода XE991 (10 -5 М) применение. Определены изменения скорости спонтанного биения и длительности потенциала действия при 50 и 90% реполяризации (APD90).
2.7. Модель инфаркта миокарда крыс
Крысы подвергались внутрибрюшинной анестезии смесью s-кетамина гидрохлорида (60 мг/кг; Pfizer, Ballerup Denmark) и ксилазина (10 мг / кг; Rompun vet, KVP Pharma + Veterinär produkte Bayer, Kiel Germany). Одна треть этих доз вводилась примерно каждые 45 мин для достижения постоянного уровня анестезии. После бритья крыс интубировали и механически вентилировали (80 вдохов в минуту, приливный объем по 2 мл на 100 г массы тела и 6 см2O положительное давление в конце выдоха). Крыс помещали на терморегулируемую грелку для поддержания температуры тела, а к животным подключали пульсоксиметр (LifeVet, Eickemeyer, Vojens, Denmark). Карта и частота сердечных сокращений измерялись непрерывно через заполненный гепарином катетер, помещенный в левую сонную артерию через срединный разрез на шее и соединенный с датчиком давления (ADInstruments MLT0699, Oxford, Великобритания). Сигнал был записан с помощью Powerlab и LabChart (ADInstruments ML866 and ML118, Oxford, Великобритания).
Крысы были случайным образом распределены на четыре группы, подвергнутые различным протоколам: vehicle, IPC, XE991, и одна получающая как IPC, так и XE991. Для доступа к сердцу была выполнена торакотомия в третьем межреберье, а также прорезаны 4-е и 5-е ребра. Вилочковая железа была отодвинута в сторону, и перикард раскрылся. Используя микроскоп (Nikon SMZ645, Амстердам, Нидерланды), лад перевязывали с помощью 6,0 Шелкового шва с конусной точечной иглой. Шов был продет через жемчужину и небольшую пластиковую трубку, чтобы создать обратимую ловушку, и мальчик был окклюзирован в соответствии с назначенной группой, как показано на Рис.2. 1. Успешное перевязывание было подтверждено бланшированием ткани миокарда. Ишемию вызывали путем затягивания Силка в течение 40 мин. После ишемического инсульта ловушка ослаблялась, и артерия реперфузировалась в течение 2 ч. МПК достигалась двумя 5-минутными циклами окклюзии лад, каждый из которых сопровождался 5-минутной реперфузией. ХЭ991 (0,75 мг/кг), растворенный в ДМСО (0,2 мл/кг Из 3,765 мг ХЭ991/мл ДМСО), вводили внутрибрюшинно за 25 мин до основного ишемического инсульта. Дозировка XE991, введенного в нашем исследовании, была основана на концентрациях, ранее использовавшихся в изолированных сердцах крыс ( Hedegaard et al., 2016), и исходя из предположения об объеме распределения 2,0 л/кг как для структурно аналогичного соединения линопирдина ( Rakestraw et al., 1994). Это привело к расчетной дозе 0,75 мг / кг XE991, что эквивалентно концентрации плазмы 1 мкм. Причина выбора 0,75 мг / кг ХЕ991 была также основана на наших телеметрических исследованиях, описывающих влияние различных доз ХЕ991 на MAP, и показывающих, что высокая доза ХЕ991 привела к смерти у 44% животных (см. раздел 3.1 результатов ). Животные, которые не получали XE991, получали внутрибрюшинную инъекцию с соответствующим количеством ДМСО.
