2.8. Оценка размера инфаркта миокарда
В конце 2-часового реперфузионного периода лад был повторно окклюзирован, и 1 мл 1% Evans blue в фосфатно-буферном физиологическом растворе вводили в левый желудочек бьющегося сердца, циркулируя по доступной сосудистой сети, тем самым оставляя область риска (ААР) незапятнанной (модифицировано из ( Fiedler et al., 1982; Ovize et al., 1994). Через 2 мин с перфузией Эванс Блю сердце было иссечено и заморожено при температуре -80 °С на ночь. На следующий день сердце было разрезано поперечно на пять секций, которые были аккуратно промыты фосфатно-буферным физиологическим раствором. Чтобы отличить жизненно важные ткани от инфарктированных участков, срезы погружали в 1%-ный раствор ТТК в фосфатно-буферном физиологическом растворе при 37 °С в течение 3 мин, погружали в холодную воду и хранили в 4% - ном формальдегиде в течение ночи. Размер инфаркта и ААР оценивали с помощью программы анализа изображений ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). Общая площадь срезов, ААР и размер инфаркта были измерены, и каждое измерение было взвешено с весом каждого отдельного среза. Оценка размеров инфаркта проводилась с помощью изображений с присвоенными номерами, не связанными с полученным лечением, а следовательно, ослепляющими наблюдателя.
2.9. Статистический анализ
Радиотелеметрическую карту и записи сердечного ритма оценивали с помощью двухсторонней ANOVA, сравнивая исходную карту перед каждым введением XE991 с картой каждые последующие 30 мин до 2 ч. Результаты Миографии оценивали с помощью двухсторонней ANOVA по сравнению с препаратами, обработанными транспортным средством. Потенциалы действия оценивали с помощью парной Т- испытание сравнивая следы XE991 с потенциалами действия корабля записанными перед применением XE991. Вес, возраст, смертность, сравнение между ААР, количество анестезии и размер инфаркта у животных, подвергнутых ОИМ, оценивались с помощью однонаправленной ANOVA, а затем с помощью теста множественного сравнения tukey post hoc, когда это необходимо. МАП и частоту сердечных сокращений у обезболиваемых животных оценивали с момента введения ХЕ991/ДМСО и каждые 30 мин ±3 мин до окончания эксперимента методом однонаправленной ANOVA с повторными измерениями с последующим многократным сравнением post hoc теста Тьюки. Статистический анализ полученных данных проводили с помощью программы GraphPad Prism (Graphpad Software, La Jolla, CA, версия 5.02). Все данные представлены в виде средств ± S. E. M. P
3. Результаты
3.1. Телеметрические исследования артериального давления и измерения ЭКГ
В телеметрических исследованиях, выполненных на сознательных крысах, 0,075 мг / кг XE991 не изменяли карту (Рис.2). 2 а). Введение 0,75 мг/кг и 7,5 мг / кг ХЕ991 увеличило карту (рис. 2 Б и в), в то время как частота сердечных сокращений достоверно отличалась только у животных, получавших транспортную терапию после введения наибольшей дозы ХЕ991 ( Рис.1). 2 D-F). Шесть крыс были обработаны транспортным средством, и девять крыс были обработаны XE991. Четыре из девяти крыс (44%) умерли через 2,2 ± 0,4 ч после инъекции 7,5 мг/кг XE991.
По сравнению с транспортным средством, XE991 индуцировал выраженные изменения ЭКГ ( рис. 3 А-Ф). XE991 увеличил амплитуду и длительность волны P, увеличил интервал PR , увеличил QT C и увеличил амплитуду T в 0,075 и 0,75 мг/кг, в то время как волна T была обращена в большую дозу 7,5 мг/кг XE991 ( Таблица 1 ). Выраженным изменением, индуцированным XE991 на ЭКГ, было снижение амплитуды комплекса QRS ( Рис.2). 3 D-F, Дополнительная Таблица 1 ).
Таблица 1 . Электрокардиография у обезболиваемых крыс получена после инфузии транспортного средства (ДМСО) и инфузии возрастающих доз блокатора каналов K V 7, XE991.
НаркотикВремя(мин)P длительность волны(МС)P амплитуда волны (МВ)Интервал PR(МС)PR сегмент (МС)QT C (МС ½ )Высота ST (ms)
Амплитуда Т (МВ)Транспортное средство20.0160 ± 0.00040.0664 ± 0.00210.0463 ± 0.00030.0312 ± 0.00040.119 ± 0.0010.0727 ± 0.00240.1210 ± 0.0017100.0188 ± 0.00060.0348 ± 0.00200.0450 ± 0.00030.0270 ± 0.00060.12 ± 0.00090.0692 ± 0.00110.1152 ± 0.0017300.0282 ± 0.00070.0395 ± 0.00140.0459 ± 0.00030.0169 ± 0.00050.11 ± 0.00090.0320 ± 0.00340.1003 ± 0.0013XE9910. 075 мг/кг20.0177 ± 0.00040,1187 ± 0,0005 а0,0523 ± 0,0001 а0,0354 ± 0,0003 а0,15 ± 0,0009 a0.0908 ± 0.0011a0,1833 ± 0,0009 а100.0198 ± 0.00040,1070 ± 0,0010 а0.0516 ± 0.0003a0.0318 ± 0.0004a0,1458 ± 0,0007 а0.0938 ± 0.0006a0,1699 ± 0,0008 а300,0227 ± 0,0005 а0.0952 ± 0.0010a0.0463 ± 0.00030.0226 ± 0.0006a0,1459 ± 0,0008 а0.0714 ± 0.0007a0,1451 ± 0,0012 аXE991
0.75 мг / кг20.0219 ± 0.0002a0.0935 ± 0.0020a0.0489 ± 0.0003a0,0275 ± 0,0003 а0,1272 ± 0,0009 а0.0676 ± 0.0009a0,1443 ± 0,001 a100,0242 ± 0,0004 а0.0867 ± 0.0011a0,0493 ± 0,0002 а0,0253 ± 0,0004 а0.1155 ± 0.00180.0581 ± 0.0010 a0,1327 ± 0,0019 a300.0231 ± 0.0004a0.0781 ± 0.0020a0,0476 ± 0,0003 а0,0243 ± 0,0005 а0.1309 ± 0.0016 a0,0132 ± 0,0019 a0.1102 ± 0.0021 aXE991 7,5 мг / кг20,0244 ± 0,0004 а0,0802 ± 0,0012 a0.048 ± 0.0002 a0,0247 ± 0,0003 а0,1268 ± 0,0010 a0.0285 ± 0.00160.1148 ± 0.0019100,0246 ± 0,0004 а0.0614 ± 0.0019a0,0471 ± 0,0003 а0.0237 ± 0.0005 a0,1257 ± 0,0009 а-0.0202 ± 0.0019 a0,1047 ± 0,0021 а300.0232 ± 0.00120,0513 ± 0,0032 a0.0447 ± 0.00060.0231 ± 0.00090,1007 ± 0,0017 a-0.1881 ± 0.0034 I-0.1192 ± 0.0009 а
Данные представляют собой средние ± S. E. M. от животных, обработанных транспортным средством (n = 6) и от животных, введенных XE991 (n = 6). A значение (P Параметры ЭКГ у животных, получавших лечение транспортным средством, не отличались и поэтому мы включили только один набор данных для транспортного средства.
В отличие от животных, введенных транспортным средством, у 50% обезболиваемых крыс, которым вводили XE991, развился миоклонус, варьирующий от небольших подергиваний в нижних конечностях, мышцах челюсти и коже живота до встряхивания головы. Генерализованный миоклонус наблюдался у двух из восьми животных, которым вводили 7,5 мг / кг ХЕ991 (см. также дополнительное видео). Таким образом, эти результаты показывают, что XE991 увеличивает артериальное давление, индуцированное выраженными изменениями на ЭКГ, и в высоких дозах связано с сокращениями скелетных мышц у интактных животных.