Адреналин восстанавливает функции тромбоцитов, подавляемые тикагрелором: механистический подход. Продолжение 4

3.2. Адреналин восстанавливает АДФ-и пар-1-АП-индуцированную агрегацию тромбоцитов, ингибируемую тикагрелором

Тикагрелор ингибировал АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов (5 [2-17] против 59 [54-73]%, Р=0,002) ( Рис.2). 1 А, Б). В то время как адреналин сам по себе почти не оказывал никакого эффекта, он полностью восстановил АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов, отмененную тикагрелором. Действительно, в присутствии тикагрелора максимальная агрегация в ответ на комбинацию была сопоставима с той, которая наблюдалась только при АДФ в отсутствие тикагрелора (62 [49-72] против 59 [54-73]%, Р=0,67). Кроме того, агрегация была более стабильной ( рис. 1А, в), так как дезагрегация была достоверно ниже при комбинации адреналина и АДФ в присутствии тикагрелора, чем только при АДФ в его отсутствии (22% против 76%, р=0,002 на 3 мин). Обладая ролью АДФ как второго агониста, высвобождаемого в ответ на сильную стимуляцию тромбоцитов, мы повторили эксперименты в отсутствие экзогенного АДФ, используя в качестве агониста PAR-1-AP. Тикагрелор также ингибировал par-1-AP-индуцированную агрегацию тромбоцитов (16 [5-25] против 70 [55-86]%, P < 0,01), которая была полностью восстановлена путем добавления адреналина (73 [69-76] против 70 [55-86]%, P=0,496) ( Рис.2). 2).

2. Адреналин восстанавливает par-1-AP-индуцированную агрегацию тромбоцитов, измененную тикагрелором Сравнение процента максимальной агрегации отмытых тромбоцитов, стимулированных 2 мкм PAR-1-AP, 10 мкм адреналином (EPI) или их комбинацией, в отсутствие или присутствии 150 Нм тикагрелора (n=6). Боксы представляют собой интерквартильный размах и медианное значение, а бакенбарды-минимальное и максимальное наблюдаемые значения. *P

3.3. Восстановление АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов не зависит от выделения плотных гранул и образования тромбоксана

Мы оценили высвобождение АТФ, чтобы отразить плотную секрецию гранул. Как и ожидалось, в отсутствие тикагрелора ни АДФ, ни адреналин сами по себе, которые являются одновременно слабыми агонистами, индуцировали секрецию АТФ промытыми тромбоцитами по сравнению с 10 мкм PAR-1-AP ( Рис.2). 3). Напротив, комбинация АДФ и адреналина индуцировала значительное высвобождение АТФ (0,69 [0,53–0,87] против 0 [0-0, 13] нмоль, для комбинации и только АДФ соответственно, Р=0,002). Однако секреция АТФ была значительно ниже при комбинации АДФ и адреналина, чем при использовании 10 мкм PAR-1-AP (0,69 [0,53–0,87] против 1,3 [1,1–1,6] нмоль, Р=0,002), несмотря на сходный уровень агрегации ( Рис.2). 1Б). В присутствии тикагрелора комбинация адреналина и АДФ, восстанавливая агрегацию тромбоцитов, не смогла индуцировать обнаруженное высвобождение АТФ. Таким образом, восстановление адреналина АДФ-индуцированной агрегации, ингибируемой тикагрелором, не связано с плотным высвобождением гранул. Также была оценена потенциальная роль образования TxA2 в качестве усилительного сигнала для активации тромбоцитов. Независимо от наличия или отсутствия тикагрелора, ни АДФ, ни адреналин, ни комбинация адреналина и АДФ индуцировали синтез TxA2, в отличие от 10 мкм PAR-1-AP (149 [100-181] нг/мл).

3. Адреналин восстанавливает АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов, ингибируемую тикагрелором, независимо от выделения плотных гранул Высвобождение АТФ (нмоль) промытыми тромбоцитами при стимуляции 10 мкм PAR-1-AP по сравнению со стимуляцией 10 мкм ADP, 10 мкм адреналина (EPI) или их комбинацией в отсутствие или присутствии 150 Нм тикагрелора (n=6). Боксы представляют собой интерквартильный размах и медианное значение, а бакенбарды-минимальное и максимальное наблюдаемые значения. *P

3.4. Адреналин восстанавливает Васп-дефосфорилирование в присутствии тикагрелора

Далее мы рассмотрели потенциальные механизмы, лежащие в основе восстановления агрегации тромбоцитов адреналином и АДФ в присутствии тикагрелора. В образцах без тикагрелора адреналин и АДФ индуцировали сопоставимое Васп-дефосфорилирование (PRI=75 [50-90] против 90 [87-95]%, НС) ( Рис.2). 4). Как и ожидалось, тикагрелор сильно уменьшил АДФ-индуцированное Васп-дефосфорилирование (PRI=15 [0-55] против 90 [87-95]%, P Напротив, тикагрелор не модифицировал Васп-дефосфорилирование в образцах, обработанных адреналином: уровни фосфорилирования были сопоставимы с тикагрелором и без него (78 [40-92] против 78 [44-94]%, Р=0,94). Добавление АДФ к адреналину не оказывало дополнительного эффекта (83 [55-98] против 78 [40-92]%, Р=0,15). Таким образом, в то время как адреналин в одиночку был неспособен индуцировать агрегацию тромбоцитов, он был способен, как и АДФ, полностью ингибировать цАМФ-путь в этом анализе и индуцировать Васп-дефосфорилирование даже в присутствии тикагрелора.

4. Адреналин восстанавливает Васп-дефосфорилирование в присутствии тикагрелора Сравнение индекса реактивности тромбоцитов (PRI, %) цельной крови, стимулированной 10 мкм АДФ, 10 мкм адреналина (EPI) или их комбинацией, в отсутствие или в присутствии 3,25 мкм тикагрелора (n=6). Боксы представляют собой интерквартильный размах и медианное значение, а бакенбарды-минимальное и максимальное наблюдаемые значения. Все образцы были сравнены к ADP самостоятельно (*P < 0,01 против ADP самостоятельно) и к ADP + ticagrelor (#P