Продолжение 2
2.5. Оценка метаболических параметров для характеристики хронической болезни почек в группе 5 / 6Nx
На 13-й послеоперационный день крыс помещали в метаболические клетки (Tecniplast Gazzada Sarl, Buguggiate, Италия) в течение 12 ч без еды для измерения потребления воды и сбора мочи. Через 12 ч из каудальной Вены был взят образец крови для оценки концентрации креатинина и мочевины в сыворотке крови. Кроме того, были взяты пробы мочи для оценки концентрации белка и креатинина. Собранные образцы крови были обработаны для получения образцов сыворотки крови. Уровень мочевины и креатинина измеряли с помощью колориметрического ферментативного анализа. Клиренс креатинина рассчитывалась по следующей формуле: клиренс креатинина = V х [Крю]/[СГ], где cКР = клиренс креатинина (мл х мин-1), в = потока мочи (мл/мин), [Крю] = мочевыделительной концентрации креатинина (мг/дл) и [СГ] = сыворотке крови концентрация креатинина (мг/дл). Концентрацию белка в моче определяли с помощью метода Фолинфенола (Lowry et al., 1951 ), с BSA в качестве стандарта. Значения были скорректированы для массы тела и потока мочи. Водный баланс измеряли как разность между 12-часовым водозабором и 12-часовым диурезом.
2.6. Оценка среднего артериального давления, частоты сердечных сокращений, почечной гемодинамики и экскреции Na + и K + с мочой
На 15-е послеоперационные сутки животные подвергались анестезии тиопенталом (60 мг/кг и 40 мг/кг, i.p., основная доза и дополнительная доза соответственно) для оценки среднего артериального давления, частоты сердечных сокращений, почечной гемодинамики и мочевой экскреции Na + и K + (Paixão et al., 1998; Vieira et al., 2018). В этот момент были сформированы 4 группы: Шам, обработанный транспортным средством (100 мкл/кг/мин физиологического раствора при непрерывной внутривенной инфузии в течение 70 мин), Шам, обработанный NPCdc (7,5 мкг/кг/мин при непрерывной внутривенной инфузии в течение 70 мин), 5/6Nx, обработанный транспортным средством и 5/6Nx, обработанный NPCdc. Режим введения NPCdc был основан на оригинальном пептиде, NP2_Casca (0,3 мкг/мл), который вводили в течение 40 мин, Evangelista et al. (2008), для снижения артериального давления. В настоящем исследовании 157,5 мкг/кг вводили путем инфузии в течение 70 мин. Катетеры вводили в трахею, левую бедренную артерию, обе яремные вены и мочеточник крыс. Сразу же после катетеризации правой яремной вены вводили БСА (4,7 г/дл, растворенные в физиологическом физиологическом растворе) со скоростью 100 мкл/кг/мин для восполнения потерь, связанных с операцией. Аналогично сразу после катетеризации левой яремной вены вводили инулин (20 мкл / кг / мин; 10% Вт/в, растворенное в физиологическом физиологическом растворе) непрерывно настаивали для оценки скорости клубочковой фильтрации. Среднее артериальное давление измеряли через катетер, введенный в левую бедренную артерию, который был присоединен к датчику давления (SP 844, MEMSCAP Inc., Дарем, Великобритания) подключается к мосту amp (ADInstruments, Австралия). Почечный кровоток измеряли с помощью проточного зонда (MA1PRB, Transonic Systems, Ithaca, NY, USA), расположенного вокруг левой почечной артерии и соединенного с аппаратурой расходомера (TS420 Transonic Perivascular Flow Module, Transonic Systems, Ithaca, NY, USA). Оценка среднего артериального давления и почечной гемодинамики начиналась через 1 ч после завершения операции и через 30 мин после начала инфузии ТС или Нпцдк. Эти параметры были собраны в течение двух 20-минутных периодов. В течение каждого периода брали пробы мочи, а также непрерывно контролировали среднее артериальное давление, частоту сердечных сокращений и почечный кровоток. До и после каждого взятия пробы мочи были получены три образца крови в общей сложности по 60 мкл.
Почечное сосудистое сопротивление рассчитывали как среднее отношение артериального давления к почечному кровотоку. Среднее артериальное давление и почечный кровоток обрабатывались с помощью аппаратного обеспечения сбора данных (Power Lab, 8/30, ML866, ADInstruments, Bella Vista, Australia), связанного с программным обеспечением LabChart (версия 7.3.4, RRID: SCR_001620, ADInstruments). Почечный поток плазмы рассчитывали из значений почечного кровотока и гематокрита следующим образом: почечный поток плазмы = почечный поток крови x (1 – гематокрит). Фракцию фильтрации также рассчитывали по следующей формуле: фракция фильтрации = скорость клубочковой фильтрации / почечный кровоток. Экскрецию Na + и K + с мочой и концентрацию Na + и K + в плазме крови оценивали с помощью пламенной фотометрии (BFC 300, BENFER, São Paulo, SP, Brazil). Фракционная экскреция Na + оценивалась по формуле: фракционная экскреция Na + = мочевая экскреция Na + / плазменная экскреция Na + х скорость клубочковой фильтрации. Фракционная к + экскреция оценивалась по формуле: фракционная к + экскреция = мочевыделительная к + экскреция / плазменная к + Х скорость клубочковой фильтрации. При необходимости показатели почечной гемодинамики нормализовали до массы тела (г) животного.
Помимо животных, описанных выше, различные животные были обработаны транспортным средством или NPCdc для сбора сердца, почек и грудной аорты. Целые и влажные сердечные массы регистрировались и нормализовывались к массе тела. Независимо от протокола, в конце эксперимента животные были обескровлены под наркозом. Количество животных в каждой группе показано на фиг. 1 и подписи к рисунку.
