После событий фильма «Отряд самоубийц» Джокер расстаётся с Харли Квинн. Однажды ночью Харли напивается в ночном клубе гангстера Романа Сайониса, также известного как Чёрная Маска, и знакомится с певицей Диной Лэнс / Чёрной Канарейкой. Позже Дина спасает пьяную Харли от попытки похищения. В ту же ночь Харли взрывает химический завод Ace Chemicals.
Тем временем детектив полиции Готэма Рене Монтойя расследует серию убийств, совершенных убийцей с арбалетом. На месте взрыва Ace Chemicals Монтойя узнаёт, что Харли осталась без защиты Джокера. Сайонис посылает Дину и своего верного помощника Виктора Заса выкрасть бриллиант, внутри которого спрятаны банковские счета криминальной семьи Бертинелли, убитой много лет назад. Юная воровка-карманщица Кассандра «Кэсс» Кейн[en] крадёт у Заса бриллиант, но полиция арестовывает её, а Кэсс проглатывает бриллиант. Харли, спасаясь от Монтойи и других людей, которым она в прошлом причиняла зло, попадает в плен к Сайонису. Роман готовится убить Харли, но она предлагает ему помочь вернуть бриллиант. Он соглашается, но также объявляет охоту на Кэсс.
Харли врывается в полицейский участок, вытаскивает Кэсс из тюрьмы и прячет её в своём убежище — тайванском ресторане, владельцем которого является Док. «Убийца с арбалетом», раскрывший себя как Хелена Бертинелли / Охотница, обращается к Доку за информацией. Она тренировалась, чтобы стать убийцей, и охотилась на гангстеров, убивших её семью. Внезапно бандиты уничтожают убежище Харли. Оказалось, что Док предал её, выдав местоположение за деньги. Харли звонит Сайонису и назначает встречу в заброшенном парке развлечений. Дина сообщает Монтойе о встрече, а Виктор замечает, что Дина оказалась предательницей.
В парке Монтойя сталкивается с Харли, но последняя выталкивает её из окна. Появляется Виктор, он усыпляет Харли дротиками и держит Дину на мушке, а затем Хелена убивает его. Рене возвращается, и вскоре армия бандитов во главе с Чёрной Маской окружает героинь. Команда женщин отбивается от них, Роман похищает Кэсс, а Харли преследует его. Она добирается до причала, где Роман готовится убить Кэсс. Кассандра выдёргивает чеку гранаты и засовывает её в куртку Сайониса. Харли толкает Чёрную Маску в воду и граната взрывается, убивая его.
Рене покидает работу в полиции и присоединяется к Дине и Хелене в команду по борьбе с преступностью под названием «Хищные птицы[en]». Харли сдаёт бриллиант в ломбард и вместе с Кэсс начинает свой бизнес по заказным убийствам.