Поиск информации о лабораторной диагностике коронавирусной инфекции похож на путешествие в тумане. Вроде и дорога есть и предположительно цель недалеко, но что-то постоянно мешает, а тропа куда-то сворачивает.
Давайте начнем с того, что COVID-19 (первоначально проходивший под названием SARS-CoV-2) это вирус. В современном лабораторном мире живые вирусы выращивают разве что в научных целях (для этого нужны живые организмы). Для массовой диагностики это долго, неэтично и дорого. Как любая живая клетка вирус имеет генетический материал – нуклеиновые кислоты. В коронавирусе он представлен рибонуклеиновой кислотой (РНК). Для выявления РНК используют метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Тест-системы для ПЦР-диагностики уже существуют
В России ученые ГНЦ ВБ “Вектор” создали ее менее чем за 7 дней с момента публикации информации о генетической последовательности вируса. Так в лабораториях ФБУЗ «Центра гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора по всей России появились ПЦР-наборы для диагностики COVID-19 больше месяца назад.
Метод ПЦР широко распространен (есть и персонал, и возможность проводить лабораторную диагностику). Он обладает высокой чувствительностью, что позволяет обнаруживать вирус в малом количестве, и короткий срок получения результатов (от 2-х до 4-х часов). Недостаток исследования в том, что он требует биоматериал, содержащий вирус, т.е. от инфицированного человека.
Вирус COVID-19 поражает дыхательные пути человека, а значит обнаружить его можно в биоматериале со слизистых оболочек дыхательных путей. ВОЗ рекомендует исследовать мокроту, если она выделяется естественным путем, мазок со слизистой носоглотки, задней стенки глотки, аспират из бронхов (при интубации или бронхоскопии) и при необходимости другой биоматериал, потенциально инфицированный вирусом. Забирать биоматериал можно с первых дней болезни, что позволяет использовать ПЦР-диагностику для раннего выявления заболевания.
Факт: По состоянию на 19.03.2020 в реестре медицинских изделий Росздравнадзора зарегистрировано три тест системы. Последняя 06.03.2020, но кто ее использует пока неизвестно.
РЗН 2020/9677 Набор реагентов для выявления РНК коронавируса 2019-nCoV методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией Вектор-ПЦРрв-2019-nCoV-RG по ТУ 21.20.23-088-05664012-2020
РЗН 2020/9700 Набор реагентов для выявления РНК коронавирусов SARS/COVID-19 методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией Вектор-OneStepПЦР-CoV-RG по ТУ 21.20.23-089-05664012-2020
РЗН 2020/9765 Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 тяжелого острого респираторного синдрома (COVID-19) методом полимеразной цепной реакции АмплиТест SARS-CoV-2
Кому проводят ПЦР-диагностику
В большинстве стран, и Россия тому не исключение, из-за массового распространения вируса пробы на исследования отбирают у пациентов по клиническим и эпидемиологическим показаниям. Мы не знаем достоверно, сколько времени вирус активен. Исследование биоматериала, забранного в неподходящее время, может дать отрицательный результат, особенно, если инфекция протекает в стертой или бессимптомной форме. С другой стороны, вирус начинает размножаться до появления симптомов, что делает человека заразным. В настоящее время (20.03.2020) нет единого руководства о частоте проведения тестирования контактным и лицам, без симптомов инфекции.
Факт: Опубликованные 11.03.2020 в журнале The Lancet данные китайских коллег говорят о том, что у 171 пациента, с подтвержденным COVID-19, вирус выделялся у выздоровевших в среднем около 20 дней (от 8 до 37 дней), у умерших пациентов вирус обнаруживался до самой смерти. Также коллеги говорят о необходимости получения двухкратного отрицательного анализа перед выпиской клинически выздоровевшего человека.
Рекомендации для пациентов
Если у вас лихорадка, кашель, затрудненное дыхание, вы обязаны обратиться за медицинской помощью. Учитывая быстрое распространение коронавирусной инфекции, такой подход логичен.
Если вы подозреваете у себя COVID-19, занимаясь самодиагностикой и обращаясь непосредственно в медицинское учреждение, вы способствуете распространению инфекции.
Если состояние тяжелое, вызывайте “скорую помощь”, если состояние позволяет, вы можете вызвать врача на дом. Не стоит самостоятельно направляться в больницу или поликлинику.
У вас возьмут мазок из носоглотки (ротоглотки) на диагностику COVID-19, если:
- Вы вернулись в течение последних 14 дней из любой страны Европы, США, Китая, Южной Кореи, Ирана и других стран с опасной эпидемиологической ситуацией (данные обновляются в официальных источниках). Имели контакт с заболевшим коронавирусной инфекцией. Имели контакт с человеком, вернувшимся из вышеуказанных стран. Биоматериал забирается на 1, 3 и 11 день.
- Вы старше 60 лет, либо младше 60 лет, но имеете хроническую сопутствующую патологию (сердечно-сосудистые заболевания, сахарный диабет, заболевания дыхательной системы, онкологические заболевания, заболевания эндокринной системы), беременная женщина. Биоматериал забирается на 1 и 11 день.
- Врач может направить на забор биоматериала в 1-й день в других случаях на свое усмотрение.
Факт: Аналогичные требования по забору биоматериала на исследования действуют и в США. 04.02.2020 министр здравоохранения и социальных служб США определил, что существует чрезвычайная ситуация в области общественного здравоохранения в отношении COVID-19. В результате Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) дало лабораториям право подавать заявки для получения разрешения на использование диагностических тестов в экстремальной ситуации (emergency use authorization, EUA) и начинать тестирование до получения разрешения. Подобные разрешения лаборатории стали получать только к середине марта. В ближайшее время это позволит обеспечить клиники страны достаточным количеством тест-систем для ПЦР-диагностики COVID-19. Соответственно и рекомендаций на массовое тестирование пока не поступало.
Диагностика COVID-19 на всех стадиях болезни
Полная клиническая картина коронавирусной инфекции пока до конца не изучена. Возможно позднее обращение пациентов за медицинской помощью, наличие легких форм инфекции. Это требует других методов диагностики. С учетом знаний о том, что большинство пациентов выздоравливает, можно предположить, что иммунная система человека борется с коронавирусом. В том числе, вырабатывая антитела, в начале класса IgM, через какое-то время класса Ig G. Значит выявление антител может стать еще одним методом диагностики инфекции.Учитывая, что иммунитет против респираторных вирусов нестойкий, одновременное выявление обоих классов антител может оказаться целесообразным.
Факт: Китайские ученые первые опубликовали 27.02.2020 статью в Журнале Медицинской Вирусологии о создании и применении экспресс-диагностики COVID-19 инфекции. Новый тест позволил одновременно выявлять антитела IgM и IgG против вируса SARS-CoV-2 в крови человека в течение 15 минут, Исследовались образцы крови, собранные у 397 пациентов с подтвержденной ПЦР-диагностикой COVID-19, и у 128 отрицательных пациентов. Общая чувствительность (положительный результат у больных) тестирования составила 88,66%, а специфичность (отрицательный результат у здоровых) - 90,63%.
Некоторые предполагают, что простота использования и быстрые результаты могут сделать этот тест пригодным для обследования предприятиями, образовательными учреждениями, аэропортами, вокзалами пациентов, независимо от того, есть ли у них симптомы инфекции. Однако, такой подход имеет много минусов. Для выработки антител организму необходимо время, а это значит, что диагностика скорее всего будет носить ретроспективный характер и позволит изолировать пациента в поздние сроки заболевания. С другой стороны, данное обследование пациентов в дополнением к стандартному ПЦР-тестированию больницами и лабораториями может повысить достоверность диагностики COVID-19. Франк Ванг, доктор философии, главный исполнительный директор BioMedomics, компании в Моррисвилле, говорит, что их дочерняя компания в Китае продала более полумиллиона подобных тестовых наборов, и продажи растут с каждым днем в некоторых странах Азии и Европы.
Многоточие
Лабораторная диагностика COVID-19 строится по общему принципу диагностики респираторных вирусов и пока остается открытой. Постановление главного государственного санитарного врача РФ, зарегистрированное 16.03.2020 позволяет расширить круг лабораторий, которые могут проводить тестирование на COVID-19 без выделения возбудителя. Какие это лаборатории и какие тест-системы будут использоваться пока неизвестно. Однако, это позволит обратиться за тестирование большему количеству пациентов, даже не имеющим признаков заболевания, в том числе в аэропорту. Можно предположить, что мы скоро увидим новую экспресс тест-систему, которая позволит разрушить вирус, сохранив его нуклеиновые кислоты для последующего их определения.
Соблюдайте рекомендованные ВОЗ, Минздравом РФ правила профилактики распространения коронавирусной инфекции https://www.rosminzdrav.ru/ministry/covid19
Следите за новостями на официальных источниках. Большинство коммерческих лабораторий находятся в равных условиях ожидания и подчиняются требованиям Роспотребнадздора.