Tor putitora, широко известный как "золотой махсир", является важной ципринидной рыбой, эндемичной для Азии, естественное распространение которой охватывает трансгималайский регион и хорошо развивается в диапазоне температур 20-25°С.
Они привлекательны как спортивная рыба (Ng, 2004), а также обладают огромным потенциалом аквакультуры. В последние годы в результате антропогенного давления, деградации окружающей среды и неизбирательного рыбного промысла популяция золотого махсира в природных водных объектах сократилась до тревожного уровня. В настоящее время он считается видом, находящимся под угрозой исчезновения, поскольку поступают сообщения об истощении популяций махсиры из различных частей Азии.
Еще одной серьезной угрозой природным запасам этого вида является повышение температуры вследствие глобального потепления, которое, вероятно, окажет дальнейшее воздействие на его продуктивность в популяциях диких животных, а также в системах аквакультуры.
Температура воды считается важнейшим фактором развития и роста рыб. Поскольку рыбы являются эктотермическими позвоночными, они адаптированы к изменениям температуры, что позволяет эффективно продолжать физиологические процессы и биохимические реакции при различных температурах.
Эти адаптационные способности позволяют им выживать за счет акклиматизации и адаптации к стрессовым температурным условиям. Изменения температуры тела угрожают нарушить целостность и функционирование мембраны из-за изменения физических свойств мембран. Многие водные животные корректируют состав своих мембранных липидов для минимизации влияния изменений температуры. Хорошо известно, что состав жирных кислот в тканях животных может быть изменен изменением температуры окружающей среды.
Вероятные последствия глобального потепления заставляют нас приложить значительные усилия для определения температурной адаптации рыб и их влияния на здоровье рыб. Насколько нам известно, о адаптивных реакциях в плане изменения состава липидов находящихся под угрозой исчезновения золотистого махсира на колебания температуры ничего не известно. В этом контексте данный эксперимент был проведен с целью выяснения влияния различных акклиматизационных температур на состав мышечных жирных кислот молодых особей золотого махсира (T. putitora) для оценки их адаптивной реакции при более высоких акклиматизационных температурах.
Экспериментальное проектирование и выращивание
Молодые особи T. putitora (13,62±2,15 г, средний вес±SE) была собрана из прудов Управления исследований холодноводного рыболовства (УИР) в Бхимтале, Уттаракханде, Индия, и помещена в прямоугольный резервуар из стеклопластика в лаборатории влажности УИР с достаточной аэрацией. Дезинфекцию рыбы проводили путем обработки солью (1% NaCl w/v) в течение 5 мин, погружением KMnO4 (5 ppm) и последующей акклиматизацией при 20 °C в течение 10 дней.
После акклиматизации девяносто рыб были случайным образом распределены по пяти акклиматизационным температурным группам в трех экземплярах (шесть рыб на акклиматизационный резервуар по 150 л) в соответствии с полностью рандомизированной схемой. Первая группа выдерживалась при температуре 20 °C. Для остальных четырех групп температура постепенно повышалась на 1 °C/сутки до температуры испытания (23, 26, 29 и 32±0,5 °C) с помощью термостатических нагревателей мощностью 150 Вт, подключенных к отдельным регуляторам температуры.
Акклиматизация продолжалась 30 дней. Рыбу кормили гранулированным кормом (35% сырого белка) из расчета 3,0% массы тела (при потреблении корма наблюдалось около 3%) дважды в день в 10,00 ч и 17,00 ч. фекалии удалялись сифоном каждый день перед отпуском корма, около 20% воды в аквариумах менялось на предварительно нагретую (в соответствии с контрольными температурами) воду ежедневно. В течение всего экспериментального периода проводилось достаточное количество аэрации для поддержания уровня растворенного кислорода.
Экстракция тканевых липидов и приготовление метиловых эфиров жирных кислот (FAME)
В конце 30-дневных акклиматических испытаний рыбы были обезболиваемы препаратом CIFECALM при 200 мкл/л (CIFE, Мумбаи, Индия), а мышечные образцы были отобраны асептически. Рыба голодала в течение 24 часов перед отбором проб.
Получение общего количества липидов методом Фольха и других (1957 г.) осуществлялось с использованием смеси хлороформ:метанол (2:1). Растворитель испарялся при непрерывном потоке азота, и остатки взвешиваются для количественной оценки количества выделенных липидов. Остатки растворяли в хлороформе/метаноле (2:1, v/v), а затем хранили в 25 мл конической колбе со стеклянной пробкой под азотом при температуре -20 °C. Затем растворяли в ней. FAME был получен методом AOAC (1995 г.) на основе выделенных липидов.
Анализ жирных кислот методом газовой хроматографии-масс-спектроскопии (GC–MS)
Анализ FAME проводился на GC–MS QP2010 (четырехкратный масс-спектрометр с энергией ионизации 70 эВ), оснащенном восковой колонкой дБ толщиной 25 мм и пленкой 0,25 мкм с гелием в качестве газа-носителя. Образец впрыскивался в отверстие впрыска в сплит-режиме при соотношении 1:15 при 250 °C, а температура печи программировалась от 50 до 230 °C со скоростью 10 °C/мин.
Масс-спектрометр получил относительное обилие m/Z в диапазоне от 40.00 до 550.00. Хроматографические данные регистрировались и интегрировались с помощью программного обеспечения GS-CLASSIC. Значения жирных кислот были представлены в процентах площади от общего количества идентифицированных жирных кислот.