Птичий простейший паразит Trichomonas gallinae был и остается важной причиной гибели многих видов птиц и обычно передается от скальных голубей к другим Columbiformes и воробьиные птицы. Передача трихомонадов от колумбидов к воробьиным видам была связана с купаниями на заднем дворе и другими источниками загрязненной воды. Традиционно считалось, что трихомонады неустойчивы в окружающей среде из-за отсутствия настоящей кистовой фазы; однако последние исследования показали, что трихомонады сохраняются в различных имитируемых условиях окружающей среды в воде и на влажном семени птиц. Добавление органического материала постоянно приводит к повышению стойкости T. gallinae в воде, хотя причина этого остается неизвестной. Добавленные органические компоненты могут включать различные микроорганизмы окружающей среды. Взаимоотношения между Trichomonas spp., экологическими бактериями и другими протистами, обитающими в почве, добавленными ОВ, предположительно играют определенную роль в увеличении стойкости трихомонад в дистиллированной воде.
Трихомонас галлины содержат водородосомы, эволюционные митохондриальные органеллы-заменители, чтобы процветать в микроаэрофильном микроклимате в полости рта, вызванном разрушением пищевода паразитами и возникающими в результате этого паразитами поражениями.
Материалы и методы
1. Измерение уровней DO с добавлением ОМ
Органический материал в количестве 1, 5, 10 и 15 г был добавлен в 500 мл дистиллированной воды в пластиковые контейнеры в 3-х экземплярах. Растворенный кислород и температуру измеряли с помощью Sper Scientific DO Meter в 5 точках времени после добавления ОВ в воду. pH измеряли в 24 часа, 48 часов и 72 часа с помощью Denver Instrument UltraBASIC pH/mV метров.
2. Измерение содержания DO с добавлением оксиразы
Для определения количества Оксиразы, необходимого для снижения содержания DO до уровня, полученного в результате добавления ОВ, мы добавили 2 количества Оксиразы к 500 мл дистиллированной воды. Растворенный кислород, температура и pH измерялись, как указано выше, в 24 часа, 48 часов и 72 часа по времени.
3. Измерение стойкости трихомонад в воде с пониженным содержанием DO
Используя приведенные выше результаты, восстановили уровни содержания DO в дистиллированной воде с добавкой ОМ путем добавления 0,5% и 1% Оксиразы® в пластиковые емкости с 500 мл дистиллированной воды. Оценили два изолята трихомонада: один из ястреба Купера 4 и один из ширококрылого ястреба 1. Оба этих ястреба показали патологические поражения, соответствующие трихомонозу, характеризующемуся фульминатным оральным некрозом. Трихомонады собирали при некропсии, культивировали в среде Diamond's с помощью антибиотиков, пока культуры не стали аксичными, и криоконсервировали в жидком азоте. Эти изоляты анализировали с помощью ПЦР для усиления области ITS, и эти последовательности сравнивали с другими изолятами Trichomonas. Последовательность КСХА относится к группе ИТС А, а КБВС - к группе В.
До прививки трихомонаса в наших симулированных птичьих ваннах изоляты восстанавливались после криоконсервации в холландских средах с помощью дополнительной сыворотки плода крупного рогатого скота, антибиотиков и антигрибковых препаратов, как сообщалось ранее. После достижения логарифмического роста трихомонады считали гемоцитометром, а культуры приспосабливали к концентрации 106 трихомонадов/мл среды обитания. Инокуляционная доза 106 трихомонад использовалась для сравнения с исследованиями инфекций живых животных с использованием 10-505, 204 организмов для тестирования эффективности препаратов и 106.
Для экспериментов по стойкости контейнер заполняли 500 мл бутилированной дистиллированной воды. Оксираза® была пипетирована в воду в количестве 0,5 и 2,5 мл. В момент времени 0 мин. 1 мл каждой культуры трихомонад добавлялся в отдельные смоделированные ванны для птиц. Воду немедленно перемешивали наконечником дозатора и отбирали пробу в течение 0 минут. Образцы были помещены в колбы культуры Falcon® 25 мл с 5 мл жидкой средой обитания голландцев. Колбы выдерживали при температуре 37 °C в течение 5 дней. В первый, третий и пятый дни после прививки колбы были исследованы с помощью световой микроскопии для определения характерного движения живых трихомонад. Были зарегистрированы положительные колбы, содержащие по крайней мере одну живую трихомонад, и отрицательные колбы были прочитаны до 5-го дня. Образцы, все еще отрицательные на 5-й день, вряд ли станут положительными. Растворенный кислород и температура измерялись в 0ч, 8ч и 30ч.
Измерение уровней DO с добавлением ОМ
Насыщенность ОВ 15 г в сутки составила 10,3% (±4,43). КО в контрольных контейнерах в течение 24 часов составлял 86,6% (±2,12). Растворенный кислород пропорционально уменьшался по мере увеличения количества ОВ в смоделированных ваннах для птиц. Во все моменты времени DO был самым высоким в контрольном контейнере и самым низким в остальных обработках. Контейнеры с ОВ имели средний pH 7,0 (±0,07) при 24 ч, аналогичный рН 7,02 в трихомонадспецифических средах роста.