Трипаносома эванси, паразит трипанозуна, происходящий из рода T. brucei, в основном встречается в Африке, Азии и Южной Америке, хотя естественно, что этот паразит может инфицировать почти всех теплокровных животных, за исключением людей. Сурра - заболевание, вызванное T. Evansi у животных, которое первоначально развивалось у верблюдов в Северной Африке, но с тех пор распространилось через Аравийский полуостров и Ближний Восток в направлении Китая и Юго-Восточной Азии, а также было импортировано в Латинскую Америку завоевателями.
Однако первый хорошо документированный случай инфицирования человека Т. Эванси был отмечен в Индии в 2005 году; он был расследован Всемирной организацией здравоохранения по просьбе Департамента здравоохранения штата Махараштра. В этом случае было доказано, что пациент вырабатывает неэффективный аполипопротеин L1 из-за двух генетических мутаций на каждом аллеле гена ApoL1. ApoL1 считается ключевым компонентом ЛПВП в нормальной человеческой сыворотке крови при лизировании трипаносом животных.
Материалы и методы
Данные и образцы человеческого организма
Образцы крови были взяты у 622 добровольцев медицинским персоналом из Чжэнчжоу, провинция Хэнань, прошедшим подготовку, а также медицинский осмотр для тех, кто хотел получить разрешение на работу в Чжаоцине, провинция Гуандун, Южный Китай. Мокрые мазки крови были сделаны для обнаружения трипаносом с помощью микроскопии. Образцы сыворотки отделялись центрифугой и хранились в пробирках Эппендорфа при температуре -80 °C до проведения лабораторных исследований. Основываясь на медицинских картах, большинство людей выросло в деревнях, расположенных примерно в 25-250 км от городов и поселков. 73% жителей Гуандуна имели опыт тесного контакта с буйволами, в то время как жители провинции Хэнань имели тесный контакт со скотом.
Образцы крысиной сыворотки
3 крысы Sprague-Dawley были инфицированы с помощью внутрибрюшинного введения 1 × 106 T. lewisi после размораживания инъекционного средства от консервации жидкого азота. Через два месяца после инфицирования у инфицированных крыс были отобраны образцы сыворотки крови для положительного контроля. Образцы сыворотки неинфицированных крыс SD были использованы в качестве отрицательного контроля.
Серологические тесты для выявления антител, направленных против T. Lewisi
Все образцы сыворотки крови были протестированы на наличие специфических для Т. Лювизи антител с использованием ИФА.
Образец Trypanosoma lewisi был очищен от крови крыс, экспериментально инфицированных T. lewisi с помощью анионообменной хроматографии с использованием целлюлозы DEAE. Эти живые паразиты промывались в среде. Пластины были опорожнены и заполнены фосфатно-буферным физраствором, содержащим 0,05% глицерина и 1% бычьего сывороточного альбумина в течение 3 ч при комнатной температуре для блокировки, промыты дважды PBS 0,05% Tween и высушены на воздухе. При поступлении в Университет Сунь Ят Сен, Гуанчжоу, Китай, пластины хранились при температуре -20 °C менее 8 мч.
Процедура ELISA проводилась путем разбавления 200 мкл образца сыворотки крови в 1:100 в PBS, который добавляли в каждую лунку, и выдерживали в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем пластины промывали, добавляя 200 мкл конъюгированного антитела HRP. После цвет разрабатывался путем добавления раствора субстрата и останавливался добавлением 50 мкл стоп раствора в каждую скважину. Оптическая плотность измерялась на 450 нм в считывателе микропланшетов.
Результаты
Серологические тесты на инфекцию Т. Эванси
Отрицательные и положительные эталонные образцы дали ожидаемые результаты, поскольку положительные эталонные образцы дали сильное склеивание, а отрицательные эталонные образцы не показали никакого видимого склеивания. Видимая агглютинация не наблюдалась ни в одном из 622 исследованных образцов сыворотки человека, и поэтому все они были признаны отрицательными при использовании CATT/T. Evansi.
Серологический тест на инфекцию Т. Льюизи: иммуносорбентный анализ Т. Льюизи на ферментной основе
Положительные и отрицательные эталонные образцы сыворотки крови крыс SD реагировали, как и ожидалось, с оптической плотностью ПК = 3.476, NC = 0.921. Для образцов человека относительный коэффициент поглощения трех образцов составлял более 2 000 при среднем показателе 2,086. В образцах из Гуандуна средний коэффициент относительного поглощения составлял 2.018, а в образцах из Хэнаня - 2.372.
Из 622 образцов сыворотки крови три образца с относительным коэффициентом поглощения > 2.000 были рассмотрены как "сильно подозрительные" образцы. 5 образцов показали относительный коэффициент поглощения 1,800-2,000, которые рассматривались в качестве "средних подозреваемых", и 7 образцов - относительный коэффициент поглощения 1,600-1,800, которые рассматривались в качестве "низких подозреваемых". Серораспространенность не была получена, поскольку ИФАИЗА еще не стандартизирована, однако три образца были сильными подозреваемыми, а еще 12 были рассмотрены как "подозреваемые", что составляет в общей сложности 2,4%.