Аннотация
Катализатор является одной из наиболее активных антиоксидантных защитных ферментов, известные тем, что они тесно сотрудничают с СОД и других производителей H2O2 при высоком потоке водорода перекисью. В настоящем исследовании каталазная активность была следующей проанализирована в образцах печени разных животных обоими способами. Метод окрашивания активности геля, спектрофотометрический биохимический метод. Были взяты пять разных классов позвоночных животных такие животные, как рыба (Cirrhinus mrigala), амфибия (Bufo) (меланистиктус.), рептилия (цвет калотов.), птица и млекопитающих. Катализаторы от этих животных различаются по следующим параметрам как показано методом биохимического анализа, и активный метод окрашивания.
Введение
Практически все организмы, которые выживают в оксической среде. Среда, в которой они способны к аэробной, и анаэробному образу жизни или и то и другое, содержат ферменты, известные как ферменты антиоксидантной защиты, которые преобразуют реактивные ферменты полупродукты кислорода (ROI) к неразрушающим соединениям. Если не демонтировать, то окись углерода, например, супероксид, водород, перекисью, и гидроксильный радикал будет взаимодействовать с макромолекулы, их производные и клеточные структуры, тем самым приводя к тококонформационным изменениям и потерю целостности. Катализатор является одним из самых активных антиоксидантные защитным ферментом, известным как высокоактивный. Сотрудничество с SOD и другими производителями H2O2 на предприятии высокий поток перекиси водорода. Каталог: перекись водорода, оксидоредуктаза; фермент порфирина железа, который катализирует выход из строя H2O2 к воде и молекуле кислорода. Катализатор вместе с пероксидазой глутатиона и супероксид-дисмутаза служит эффективным средством поглотителя активных видов кислорода (ROS) предотвращая повреждение клеток. Каталог позвоночных животных, имеет относительную молекулярную массу от 225,000 до 225,000. 250,000 и состоит из четырех идентичных белков. Субъединицы, каждой из которых содержит железную группу пучков привязанного к своему активному сайту. Каждая субъединица обычно имеет одну молекулу NADPH, связанную с окислением своим H2O2O2. Этот NADP может служить окислением своим H2O2O2 для защиты фермента от субстрат.
Материалы и методы
1. Животные
Пять разных животных из пяти различных классов позвоночные. Это рыба (Cirrhinus, миригала), амфибия (Bufo melanistictus.), рептилия, птица.
Птица, млекопитающее (Rattus rattus). Рыба и птица были закупленны у Бхубанесвара, штат Орисса, Индия. Жабы и садовые ящерицы были получены от Бхубанесвара. Среда обитания, Орисса, Индия. Они были акклиматизированы в стандартные условия. Вистарные крысы штаммов были получены из Национального института питания, Хайдарабад, Индия. Взрослые самцы крыс в возрасте 90-120 дней весят около 400 гр, для настоящего исследования использовали 250-350 гр. Крысы поддерживались в стандартных условиях (Sahoo et al.., 2008a). Здоровые и активные животные были взяты для того, чтобы учиться. Уход за животными, их обслуживание и эксперименты были проведены под наблюдением. Регулирование деятельности институционального комитета по этике животных (ИАЭК) Комитетом в целях контроля и Надзора за экспериментами на животных (CPCSEA),
2. Химикаты
Катализатор, кучегидропероксид, сыворотка крупного рогатого скота, альбумин, TEMED, целлюлоза DEAE были получены из следующих источников Sigma Chemical Company, США. N' N' -bis акриламидная кислота. Пероксидаза редис (HRP), Аммоний персульфат и додецилсульфат натрия (SDS), тетрахлорид диаминобензидина (DAB), акриламид были приобретены в исследовательской лаборатории СИСКО, Индия. Полный и неполный адъювант Фрейда, козлиный анти-кролик-ИгГГ биотинилированный, конъюгат стрептавидин-пероксидазы и конъюгат козла-антикробита-IgG-пероксидазы конъюгат были получены из Бангалорского джина, Бангалор, Индия. Нитроцеллюлозная мембрана была приобретена у Шайнер и Шалль, Швейцария. Все остальные химикаты и использованные буферы были самого высокого качества коммерчески доступными, были получены от Merck-Schudant, GERMANY.
3. Обработка тканей
Животных приносили в жертву, а печень иссекали быстро, солевым раствором холодного льда (0,9%, вес/вт), Пэт высох в фильтровальной бумаге. Ткань была взвешена и хранятся во льду для дальнейшей переработки. 20% (в/в), гомогената ткани готовили в 0,25 М ледяная сахароза, приготовленная в фосфатном буфере (50 мММ) pH 7.4). Гомогенат был получен с помощью Поттер - Elvehjem тип моторный стеклянный тефлон гомогенизатор. В изоляция субклеточных органелл подклеточных органов, необработанный гомогенат печени процеживали через четырехслойную стерилизованную сыровяленую ткань и фильтровальный материал, были центрифугируются при 600 ´ g в течение 10 минут при температуре от 4°C до 4°C. осаждают ядра и клеточный мусор. Сверхъестественная жидкость была далее центрифугирована на 10,000 g в течение 20 минут при 4°C для отделения митохондриальных гранул от митохондриальных гранул, постмитохондриальная фракция (PMF) в качестве надосадочной жидкости (Саху, 2013). PMF был обработан немедленно. для различных биохимических анализов. Все центрифугирование в лабораторной центрифуге "Сигма" были выполнены следующие этапы работ.
4. Оценка белка
Оценивалось содержание белка в пробах PMF печени, по методу Лоури и др. (1951). Реагент Biuret свежеприготовлено, путем смешивания растворов A, B и C в следующих количествах, в пропорции 100:2:2. Решение А составляло 2% (вес/об) карбонат натрия (Na2CO3) в 0,1 Н натрия раствор гидроксида (NaOH); раствор B содержал 0,5 %. (w/v) сульфат меди (CuSO4) в дистиллированной воде, и раствор С содержал 1% натрия тартарат калия (KNaC4H4O6) в дистиллированной воде. Коммерчески был использован фенольный реагент Folin & Ciocalteu's. После разбавления дистиллированной водой в пропорции 1:2. (v/v). Образцы были разбавлены надлежащим образом и содержали 0,1 мл. Произведен отбор пробы и объем составил до 0,5мл дистиллированной воды. Потом 5 мл биуретического реагента было добавленно в вихревую трубку позволяющей выдерживать 10 минут при комнатной температуре. К этому 0,5 мл 0,5 мл. Добавлен фенольный реагент Фолин-Киокалтеу, вихревой а затем инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Цвет реакции был прочитан напротив пустой.
Раствор бычьего сывороточного альбумина (БСА) (1 мг/мл) дистиллированная вода) использовалась в качестве рабочего стандарта. Он дал линейную кривую в диапазоне концентраций 25-125 мг. Содержание белка выражалось в мг/г влажной массы тела/ткани (Sahoo, 2013).