Два эксперимента с горшками проводились на глинисто-суглинистой почве в течение зимних сезонов 2014/2015 и 2015/2016 годов на экспериментальной ферме сельскохозяйственного ботанического факультета Университета Мансура. В воде содержание (WC) в полевых условиях (30,8% и 31,0%), WC в постоянной точке увядания (24,4 и 24,6%), насыпная плотность в сухом состоянии (1,38 и 1,37 г / см3), pH (7,1 и 7,2), содержание органических веществ (1,2% и 1,1%) и электропроводность (EC) (1,10 и 1,11 дСм / м) экспериментальной почвы в оба года соответственно. Эксперименты проводились в полностью рандомизированной схеме.
Пластиковые горшки (диаметром 40 см), содержащие однородные высушенные воздухом почвы, были разделены на шесть групп, каждая из которых состояла из 10 горшков. Фосфор в виде суперфосфата кальция из расчета 2 г / горшок и 1 г / горшок калийных удобрений в виде K + сульфата добавляли и смешивали с верхними 3 см почвы всех горшков перед посадкой. Мы использовали семена канолы сорта Pactol, сертифицированные ARC, Министерство сельского хозяйства Египта. Десять стерилизовали (замачивание в 0,001 HgCl2 в течение 1 мин, затем несколько раз промыли с дистиллированной водой) высушенные на воздухе семена были посажены в каждом горшке 10 ноября в оба сезона. После полного появления всходов (через 20 дней после посева) рассаду прореживали до 4 здоровых и однородных растений на горшок. Азотное удобрение добавляли через три интервала через 20, 30 и 60 дней после посева в виде нитрат аммония из расчета 0,5, 2 и 0,5 г / горшок соответственно. Горшки были разделены на шесть групп.
Первая группа, орошаемая только водой, служила контролем. Вторую и третью группы опрыскивали листвой отдельно с 50 и 100 мкМ SNP соответственно. Четвертая группа была засолена 100 мМ NaCl через поливную воду. Пятая и шестая группы были засолены 100 мМ NaCl и опрысканы 50 и 100 мкМ SNP соответственно. Перед применением к раствору SNP добавляли дважды в количестве 0,05% в качестве поверхностно-активного вещества. Опрыскивание проводили дважды за 50 и 70 дней от посева (DFS) до полного стока в течение поздних часов дня с использованием ручного распылителя. Образцы растений случайным образом собирали при 90 DFS для оценки орфологических, физиологических и анатомических испытаний и при 150 DFS для урожая и его компонентов.
Морфологические характеристики
Десять случайно выбранных растений канолы собирали для определения длины побега, количества листьев / растения, площади листьев, побегов свежего и сухого веса. Площадь листа (см2) измеряли с использованием Leaf Area Meter, AM 300 (ADC Bioscientific Ltd).
Физиологические и биохимические характеристики
- Фотосинтетические пигменты были извлечены из 3-го терминального верхнего листа в течение 24 часов в лаборатории. Затем оптическую плотность экстрактов регистрировали при 470, 653, 666 нм спектрофотометрически (Spekol 11, UK); Концентрацию фотосинтетического пигмента рассчитывали по уравнению, введенному Lichtenthaler & Wellburn (1985), и выражали в мг / г свежего веса (FW).
- Водный статус и осмопротекторы: % WC был оценен в соответствии с Fernandez-Ballester et al. (1998). Между тем, процентное содержание воды в листе (LRWC%) анализировали с использованием Kaya et al. (2013) методология с помощью уравнения LRWC (%) = [(FWDW / (TW-DW)] × 100, где DW - сухой вес и TW твердый вес. Вкратце, листовые диски были немедленно взвешены для записи FW, затем диски погружали в дистиллированную воду на 6 часов, а затем снова взвешивали для записи TW, и, наконец, листовые диски высушивали в сушильном шкафу при 60 ° C в течение 24 часов для регистрации DW. Концентрацию пролина (мг / г FW) оценивали с использованием описанной процедуры в Arbona и др. (2003) с использованием кислого реагента нингидрина. Общая концентрация растворимых углеводов (мг / г FW) была оценена с использованием реагента антрона (Watanabe et al., 2000).
- Конечная концентрация калия, натрия и хлорида: ионы K +, Na + и Cl- экстрагировали кипящей водой в течение 2 ч, следуя методам Chaudhary et al. (1996). Количества Na + и K + были оценены с помощью пламенного фотометра. Концентрации Na + и K + рассчитывали на основе стандартной калибровочной кривой и выражали в процентах. С другой стороны, концентрацию хлорида в водном экстракте рассчитывали титрованием по 0,01 н. Раствору нитрата серебра, используя 5% K + дихромат (K2CrO4) в качестве индикатора, как описано Fatma et al. (2014) и выражается в мг / г DW.
- Окислительное нарушение и стрессовое повреждение. Перекисное окисление липидов определяли количественно, оценивая концентрацию малонового диальдегида (MDA), продукта расщепления перекисного окисления липидов (Shao et al., 2005), используя реакцию тиобарбитуровой кислоты. Концентрацию МДА в мкмоль / г FW оценивали с использованием коэффициента экстинкции 155 мМ-1 см-1. Перекись водорода (мг / г FW) оценивали по образованию комплекса гидропероксид титана (Rao et al., 1997). Оценка процента утечки электролита (ELP) была использована для изучения проницаемости мембраны в соответствии с протоколом Goncalves et al. (2007). Листовые диски помещали в пробирку, содержащую 25 мл дистиллированной воды затем помещают при комнатной температуре на 4 часа и определяют электропроводность (ЕС1) раствора; После этого образцы выдерживали при 100oC в течение 1 часа, затем образец доводили до лабораторной температуры и измеряли EC2. ELP рассчитывали с использованием уравнения: FLP = EC1 / EC2 × 100.
- Анализ для удаления ROS (неферментный): аскорбиновую кислоту (мг / г FW) экстрагировали и определяли по методу Sadasivam & Manickam (1996) титрованием по отношению к 2,6-дихлорфенол индофенолу. Общие фенольные соединения определяли количественно по протоколу Юлкенена-Титто (1985) с использованием реагента Фолина-Чокальто с сопутствующим образованием синий комплекс; значения были выражены как мг галловой кислоты / г FW.