⠀⠀⠀
Итак, ПЦР - полимеразная цепная реакция.
⠀⠀⠀
Это метод, позволяющий наработать много ДНК из небольшого количества исходной.
⠀⠀⠀
В основе метода лежат принципы репликации ДНК в природе(см. стори).
⠀⠀⠀
Для того, чтобы провести ПЦР нужны следующие компоненты:
⠀⠀⠀
Исходная ДНК (это матрица, с которой считывается информация)
⠀⠀⠀
Праймеры (короткие ДНК-затравки)
⠀⠀⠀
dntp (это дезоксирибонуклеотидтрифосфаты, “кирпичики”, из которых будет строиться комплементарная цепочка)
⠀⠀⠀
ДНК-полимераза
⠀⠀⠀
Буфер(в котором сможет работать ДНК-полимераза)
⠀⠀⠀
Все смешивается, получается наша реакционная смесь.
⠀⠀⠀
Теперь по этапам:
⠀⠀⠀
Первый этап - денатурация
⠀⠀⠀
Для того, чтобы праймеры могли «отжечься» на ДНК, для начала необходимо разрушить водородные связи между двумя цепями. Пробы нагревают до 93-96 градусов.
⠀⠀⠀
Второй этап - отжиг праймеров
⠀⠀⠀
Температуру понижают до нужной (40-75 градусов), чтобы праймеры могли провзаимодействовать с одноцепочечной ДНК (по принципу комплиментарности). У каждого праймера своя специфическая температура.
⠀⠀⠀
Ах да, как правило, нужно два праймера: FORWARD & REVERSE
⠀⠀⠀
Праймеры отжигаются с двух сторон, ограничивая участок ДНК, который нужно копировать.
⠀⠀⠀
Этот этап называют гибридизацией праймеров.
⠀⠀⠀
Третий этап - элонгация.
⠀⠀⠀
Тот самый этап, когда подключается фермент ДНК-полимераза и синтезирует комплементарную цепь ДНК путем удлинения праймеров из dntp (при температуре 60-75 градусов).
⠀⠀⠀
Для получения достаточного количества ДНК нужно от 20 до 50 таких повторяющихся циклов (зависит от исходной концентрации).
⠀⠀⠀
Новые синтезированные ДНК выступают в качестве матриц для последующих циклов(схема в карусели).
⠀⠀⠀
Область применения ПЦР широка:
⠀⠀⠀
Криминалистика
Мед. диагностика
Установление отцовства
Клонирование генов
Секвенирование ДНК
Мутагенез
⠀⠀⠀
Но это дальше, а пока плюсиком в комментариях и лайком, дайте мне знать, интересно ли вам?:)