Юрий Никулин родился 18 декабря 1921 года в городе Демидове. Его семья была тесно связана с театром: отец Владимир Андреевич учился на юриста, а по возвращению с армии устроился актером в театр, мать Лидия Ивановна тоже была актрисой театра. Примечательно, что родители Юрия были известны в городе именно как актеры-комедианты, что немало повлияло на дальнейшую судьбу мальчика.
В школе, куда Юрия оправили в семь лет, учителя поголовно жаловались на поведение мальчика, по их словам, он вел себя «словно клоун». Но для Никулина подобная характеристика была комплиментом. Учился парень средне, часто получая замечания на уроках. Он также не мог похвастаться хорошей памятью, заучивание наизусть давалось мальчику с трудом. Исключением были смешные истории и диалоги, которые Юрий разучивал, играя в местном драматическом кружке. Руководителем театрального кружка был его отец, который приложил немало усилий, чтобы раскрыть комедийный талант сына.
После седьмого класса многие дети ушли в разные спецшколы. Никулин мечтал поступить в военную спецшколу, куда пошел его друг, но родители посчитали, что этот вариант не подходит сыну с его веселым и бесшабашным характером. Тем не менее, Юрию все же пришлось покинуть родную, образцовую школу и перейти в учебное заведение по соседству, которое он окончил в 1939 году.
Сразу после школы Никулина призвали в армию на долгих семь лет. В ноябре 1939 года Юрий Никулин попал в 115-й зенитно-артиллерийский полк. В период советско-финской войны его батарея защищала подступы к Ленинграду под Сестрорецком. Когда началась Великая Отечественная, будущий актер воевал там же, недалеко от Ленинграда. В 1943 году заболел воспалением легких и был направлен в госпиталь в городе на Неве, а после выписки был контужен во время одного из авианалетов. Затем Никулина направили в 72-й отдельный зенитный дивизион под Колпино. Демобилизован в 1946 году в звании старшего сержанта.
Никулин награжден медалями «За отвагу», «За оборону Ленинграда», «За победу над Германией». В последний год службы артист занимался исключительно творческой самодеятельностью по приказу капитана: сначала он был тренером футбольной команды, однако после провальной игры был освобожден от этой работы, позже занялся постановками и концертами.
Впервые Юрий Никулин вышел на манеж цирка 25 октября 1948 года вместе с Борисом Романовым для исполнения репризы «Натурщик и халтурщик».
В 1949 году Никулин стал клоуном цирка. Первое время он выступал в качестве ассистента популярного клоуна Карандаша, а позже стал работать в паре с комедиантом и акробатом Михаилом Шуйдиным. Юрий выступал на арене цирка более тридцати лет, совмещая работу со съемками в кино. В 1981 году его повысили до главного режиссера, а год спустя он занял место директора. Под его руководством Московский цирк процветал, для него было построено новое, более современное здание. Всего в стенах родного развлекательного заведения артист проработал около пятидесяти лет.
Юмористический талант Никулина пригодился ему и на телевидении, где с 1993 года по 1997 год он был ведущим телепрограммы «Белый попугай» на телеканале «ОРТ».
В 1996 году актер основал благотворительный фонд «Цирк и милосердие», целью которого была помощь молодым артистам цирка, а также артистам, которые посвятили всю свою жизнь развлечению людей.
В кино Юрий Никулин попал благодаря цирку. В 1958 году для съемок картины «Девушка с гитарой» режиссеру Александру Файнциммеру потребовался комедийный персонаж пиротехника, которого и сыграл талантливый цирковой артист. Несмотря на незначительность роли, актер пришелся зрителям по душе, они запомнили веселого и смешного парня. Это и стало решающим фактором в карьере Никулина. Ему предложили сыграть ещё несколько схожих ролей в фильмах «Неподдающиеся» и «Яша Топорков».
В 1971 году Юрий Никулин сыграл с Евгением Евстигнеевым, Андреем Мироновым и Георгием Бурковым в еще одной всенародно любимой комедии «Старики-разбойники» Эльдара Рязанова. По сюжету ленты не желающие уходить на пенсию друзья затевают «преступление века», чтобы сохранить работу.
Из последних серьезных работ следует отметить драму "Чучело", где Никулин сыграл дедушку главной героини в исполнении юной Кристины Орбакайте. В кино Никулин снимался вплоть до 1983 года. Одной из последних его комических ролей стал персонаж юмористического киножурнала «Ералаш» дядя Юра.
Особняком стоят роли Никулина в фильмах о войне. Юрий Никулин снялся в фильме «Они сражались на родину» Сергея Бондарчука. Также Никулин сыграл военного журналиста Лопатина в картине «Двадцать дней без войны» режиссера Алексея Германа-старшего. Изначально руководство Госкино не желало приглашать на эту роль Юрия Никулина, что привело в ярость автора одноименной книги Константина Симонова, слово которого было значимым. Симонов заявил, что видит в этой роли только Никулина. Так Юрий Владимирович был утвержден.
Юрий Владимирович запомнился не только ролями в кино, но и песнями. Можно без преувеличения утверждать, что «Песню про зайцев», «Если б я был султан» и «Постой, паровоз..» знает вся страна. Также не утихают страсти по поводу того, какой национальности был Юрий Никулин. Существует точка зрения, что Юрий Владимирович по причине своей внешности может быть евреем. В одном из своих интервью он даже обмолвился, что однажды «отказался уезжать в Израиль».
Жена - артистка цирка Татьяна Никулина (1929-2014), сын - Максим (1956 г.р.), с 1997 года - Генеральный директор и художественный руководитель Московского цирка Никулина на Цветном бульваре.
Юрий Никулин умер 21 августа 1997 года в Москве, спустя 16 дней после перенесённой операции на сердце.
Похоронен 26 августа на Новодевичьем кладбище столицы, участок № 5, ряд № 23а, место № 5.
В честь великого клоуна назван цирк на Цветном бульваре, в котором значительную часть жизни проработал Юрий Владимирович.