После проводки желательно максимально быстро залить образцы ткани в парафин, поскольку избыточное пребывание в нем объектов может их уплотнить. Ткани можно задерживать в заливочном центре или последней станции парафина на срок около 1-2 часов, но не более. Мелкие биопсии особенно не рекомендуется передерживать в парафине, так как это пересушивает их. В некоторых случаях, например, при проводке в двух корзинах карусельного процессора, материал из второй корзины должен быть выдержан в последнем парафине дополнительное время, ведь финиш процесса проводки считается по первой корзине. В этом случае первая корзина находится в последнем парафине, а вторая — в предпоследнем, следовательно, в ней образцы будут недопроведенными по времени этой станции. Здесь можно отправить на заливку первую корзину, а на её место поместить вторую.
Заливка материала
Заливку можно выполнять двумя способами: вручную, используя разные формы и автоматически, с помощью заливочного центра. В заливочном центре есть таймеры старта и отсрочки. Желательно заливочный центр держать горячим в течение всего рабочего дня, например, с 6 утра и до 17 часов, так как перезаливка может потребоваться в любое время.
При любом способе необходимо соблюдать следующие принципы:
- Заливочный парафин должен быть нагрет на 5-6оС выше точки плавления парафина и при заливке он не должен застывать. При застывании и наливке остывшего парафина в нем образуются пузырьки воздуха.
- Ткань, подлежащая заливке, также не должна застывать и покрываться плёнкой.
- Заливать нужно с помощью горячего, но и не перегретого пинцета, чтобы не оставить ожоги на ткани.
- Пинцет необходимо протирать после каждого залитого объекта во избежании попадания микроскопических кусочков в другой блок. Бывает, невидимые глазу кусочки соскобов или плацент попадают в материал другого пациента, и патологам остаётся только гадать, откуда, например, в коже ворсины хориона.
- Следует сперва наливать парафин в форму, а затем помещать в него кусочек ткани и ориентировать в форме так, как необходимо (об ориентации объектов расскажем в наших следующих выпусках).
- При заливке формы не должны быть переполнены, но количество налитого парафина должно быть достаточным, чтобы блок удерживался на кассете во время микротомии.
- Необходимо избегать механического травмирования заливаемых объектов, они могут распадаться от сильного нажатия.
- При заливке вручную на верхнюю часть залитого блока помещают номер. При заливке в аппарате, сверху заливочной формы помещают маркированную кассету.
- Дать остыть блоку. Чем блок больше и толще, тем дольше он должен застывать.
- По окончании работы с каждого рабочего место должны быть убраны все остаки парафина и заливаемого материала, а ёмкости для расплавленного парафина должны быть наполнены.
Как понять, что блок застыл?
Парафин начинает застывать со всех краев одновременно, и происходит это относительно быстро, за несколько минут. Но внутри он застывает дольше, и длится этот процесс может от 20 минут до суток (в зависимости от состава парафина и размера блока).
Если после схватывания блока форму с залитым кусочком ткани из заливочного центра поместить в морозилку, то блок уже можно будет резать примерно через 1 час.
Из формы блок можно вынуть через несколько минут, парафин на холоде сжимается и отскакивает от формы (обычно раздается характерный щелчок; если блоков много - можно услышать треск). Но это не значит, что блок готов к резке, его нужно еще подержать в морозилке или на охлаждающей панели, желательно не менее часа.
Практические советы
При работе с большим количеством кассет обязательно нужно соблюдать правило: открывать только одну кассету, заливать только одну форму и следующую кассету брать в руки только после сбрасывания крышки (при использовании заливочной станции) или всей кассеты (при ручном методе, если лабораторию не обеспечивают кассетами и приходится их вторично использовать).
Чтобы уголки или формы не прилипали к поверхностям и друг другу, и от них легко отходил парафин, их нужно смазывать раствором этанола/глицерина 1/1, либо 4/1.
Пинцет также не должен остывать при заливке. Лучше всего пользоваться специальными пинцетами с электроподогревом. При их отуствии нагревать пинцет можно над пламенем спиртовки (не самый безопасный метод), нагревательных столиках, либо подогревать инструменты в специальных лунках заливочного центра.
Парафин для заливки лучше использовать тугоплавкий, 58-60оС, поскольку, чем парафин труднее плавится, тем он меньше нагревается в процессе микротомии, и с такого блока проще получить тонкий срез.
Продуктивность этапа
Средний уровень продуктивности на заливке равен 60 блоков/час. Он посчитан исходя из коэффициента использования рабочего времени 75% и эквивалентен различным уровням выхода: 90 блоков/2 часа и 180 блоков/4 часа. Поскольку при заливке высокий уровень напряжения, то эта задача должна быть ограничена сменой, но не более 4 последовательных часов. Поэтому рабочее место для заливки должно быть хорошо освещено, не быть на сквозняке или в холоде и оснащено удобными инструментами (пинцетами, прессами для придавливания материала к дну блока) и мебелью, позволяющей работать несколько часов непрерывно.